Analytické postupy pro izolaci a stanovení významných antioxidantů – Ing. Petr Dobiáš

Anotace:

Tato práce je zaměřena na izolace a stanovení vybraných antioxidantů v rostlinném materiálu. K tomuto účelu bylo vyuţito široké škály extrakčních metod, a to extrakční metody vyuţívající ultrazvukové lázně (USE) nebo ultrazvukové sondy (HOM), vysokotlakou extrakci rozpouštědlem (PFE), extrakci nadkritickou tekutinou (SFE) a klasickou extrakci v Soxhletově extraktoru. Orientačně byla testována také moţnost provedení výluhu antioxidantů do vody. Získané extrakty byly analyzovány metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení se spektrofotometrickým detektorem v UV oblasti (HPLC-UV). Úvodní část je zaměřena na teoretické aspekty celé práce. Jsou zde popsány antioxidanty z hlediska jejich výskytu, vlastností, chemické struktury a jejich účinků v organismu. Dále jsou podrobně popsány extrakční metody jak pro izolaci antioxidantů, tak pro jejich analýzu, včetně kapitoly věnované různým technikám stanovení antioxidační kapacity. V experimentální části práce byly optimalizovány pracovní postupy pro všechny výše uvedené extrakční metody. Zvolené podmínky byly aplikovány na izolaci antioxidantů z 16 reálných vzorků rostlin. Dále byla vyvinuta vhodná HPLC-UV metoda, která byla pouţita při analýze získaných extraktů. U všech extraktů byla také stanovena jejich antioxidační kapacita. K tomuto účelu byla vyuţita metoda zaloţená na redukci 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl radikálu (DPPH?), přičemţ hodnota byla vyjádřena jako ekvivalent kyseliny galové (GAE). …víceméně

Abstract:

This dissertation is focused on isolation and analysis of target antioxidant mixture in plant material. For this purpose several extraction techniques were used. These were ultrasonic bath extraction method (USE), ultrasonic probe extraction method (HOM), pressurised fluid extraction (PFE), supercritical fluid extraction (SFE) and method using the Soxhlet extractor. Water infusion was also tested. All obtained extracts were analysed by high performance liquid chromatography coupled with ultraviolet detector (HPLC-UV). The first part deals with theoretical aspects of the work. Antioxidants, their occurrence, characteristics, chemical structures and their effect on organisms are described. Also the fundamentals of the analytical methods for antioxidant extraction and their analysis are mentioned there. One chapter is also focused on different methods for antioxidant capacity evaluation. All extraction techniques were optimised in the experimental part of this work. Also the HPLC-UV method suitable for antioxidant analysis was optimised. Obtained conditions were applied for the 16 real plant samples analyses. The antioxidant capacity of all plant extracts was measured. For this purpose the method using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH?) reduction was used, while the antioxidant capacity value was expressed as gallic acid equivalent (GAE). …víceméně