Porovnání vlivu rychlosti chlazení a mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat

Pokorná, Pavla

EN SKPřihlásit se Přihlásit se (EduID)

Theses ehfwxk

Porovnání vlivu rychlosti chlazení a mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat – Pavla Pokorná

Pavla Pokorná

Diplomová práce

Porovnání vlivu rychlosti chlazení a mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat

Comparison of the effect of cooling and freezing rate on the quality of the insemination dose of livestock

Anotace:

Kryokonzervace gamet je klíčový krok v umělé inseminaci zvířat. U savců se daří optimalizovat mrazící protokoly a dosahuje se dostačujících výsledků. U ptáků stále není proces kryokonzervace spermií uspokojivě optimalizován. Je to způsobeno jejich odlišnou morfologickou stavbou. V práci byly porovnány odlišné výšky chlazení od hladiny tekutého dusíku a sledován vliv různých komerčních ředidel s přídavkem kryoprotektantu. Inseminační dávky byly tvořeny směsným vzorkem ejakulátů od čtyř kohoutů plemene česká slepice zlatá kropenatá. Plemeno je zařazeno na seznam genových zdrojů České republiky a jedná se o geneticky ohrožený druh. Kohouti byli chováni za stejných podmínek v pokusné a demonstrační stáji při ČZU v Praze. Před a po zamrazení byla u spermií změřena celková mobilta na mCASA (iSperm, Aidmics Biotechnology Co., Ltd., Taipei, Thaiwan). Životnost spermií (PMI), celistvost plazmatické membrány (PMD), akrozomální poškození (ACRD) a dvojí poškození spermií (poškození plazmatické membrány i akrozomu) (PAD) bylo měřeno pomocí průtokového cytometru (Novocyte 3000, Acea Biosciences). V prvním experimentu se hodnotil vliv výšky chlazení na funkční parametry spermií. Vybrány byly tři výšky – 3,5 cm, 5,0 cm a 7,5 cm. Celková motilita po rozmrazení byla nejvyšší u výšky 5,0 cm. Nejhorší funkční parametry vykazovaly spermie při chlazení na výšce 7,5 cm. Z měřených parametrů bylo nejvíce ovlivněné dvojí poškození spermií. Naopak nejméně bylo ovlivněno poškození akrozomu. V druhém experimentu se hodnotil vliv přídavku tří různých ředidel (Poultry media®, Raptac® a NeXcell®) s přídavkem 9% kryoprotektantu N-methylacetamid (NMA). Dále se hodnotil vliv teploty při rozmrazení (5 °C/100 sekund a 40 °C/30 sekund). Celková motilita byla na hladině významnosti p <0,0001 nejvyšší u ředidel Poultry media® a Raptac®. Nejhorší výsledky byly u použití ředidla NeXcell® (p <0,05). PMD bylo na hladině významnosti p <0,0001 nejvyšší u ředidla NeXcell®, ACRD dosahovalo na hladině významnosti p <0,0001 nevyšších hodnot u ředidla Poultry media® a PAD bylo na hladině významnosti p <0,0001 nevyšší u ředidla NeXcell®. Různé teploty při rozmrazení neměly statisticky významný vliv na sledované parametry spermií. Jako nejvhodnější postup kryokonzervace kohoutích spermií bylo vyhodnoceno použití ředidla Poultry media® nebo Raptac® s 9 % NMA a chlazení 3,5 cm od hladiny tekutého dusíku. Nejméně vhodné se ukázalo ředidlo NeXcel® a výška chlazení 7,5 cm. Nicméně je nutné brát v potaz individualitu chovných jedinců i rozdíly mezi odběrovými dny. …více

Abstract:

Cryopreservation of gametes is a key step in artificial insemination of animals. In mammals, freezing protocols are already being optimized and are achieving sufficient results. In avians, cryopreservation of sperm does not achieve nearly as good results. This is due to their different morphological structure of sperm. In this study different cooling heights from the level of liquid nitrogen were compared and the effect of different commercial diluents with the addition of cryoprotectant was investigated. The insemination doses were made up of a mixed sample of ejaculates from four roosters of the Czech golden speckled hen breed. The breed is included in the list of genetic resources of the Czech Republic and is a genetically endangered species. The roosters were kept under the same conditions in the experimental and demonstration barn at the ČZU in Prague. Sperm were measured for total motility on mCASA (iSperm, Aidmics Biotechnology Co., Ltd., Taipei, Thailand) before and after freezing. Sperm viability (PMI), plasma membrane damage (PMD), acrosomal damage (ACRD) and double damage (both plasma membrane and acrosome damaged) (PAD) were measured using a flow cytometer (Novocyte 3000, Acea Biosciences). In the first experiment, the influence of the cooling height on the functional parameters of the sperm was evaluated. We choose three heights – 3.5 cm, 5.0 cm and 7.5 cm. Total motility after thawing was highest at a height of 5.0 cm. The worst functional parameters of sperm were at height of 7.5 cm. Of the parameters measured, double damage was the most affected. On the contrary, acrosome damage was least affected. In the second experiment, the effect of the addition of three different diluents (Poultry media®, Raptac® and NeXcell®) with the addition of 9% cryoprotectant N-methylacetamide (NMA) was evaluated. Furthermore, the influence of temperature during thawing (5 °C/100 seconds and 40 °C/30 seconds) was evaluated. Total motility was the highest at the p <0.0001 significance level with Poultry media® and Raptac® diluents. The worst results were with the use of NeXcell® diluent (p <0.05). PMD was the highest at the p <0.0001 significance level with NeXcell® diluent, ACRD was the highest at the p <0.0001 significance level with Poultry media® diluent, and PAD was the highest at the p <0.0001 significance level with NeXcell® diluent. Different temperatures during thawing did not have a statistically significant effect on the observed sperm parameters. The use of Poultry media® or Raptac® diluent with 9% NMA and cooling 3.5 cm from the level of liquid nitrogen was found suitable procedure for cryopreservation of rooster sperm. The least suitable for us was NeXcel® and a cooling height of 7.5 cm. However, it is necessary to consider the individuality of the breeding individuals and the differences between sampling days. …více

Klíčová slova

mrazící křívka kryokonzervace ředidla průtoková cytometrie ejakulát

Keywords

ejaculate freezing curve cryoconservation extenders flow cytometry

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 25. 4. 2023

Obhajoba závěrečné práce

Obhajoba proběhla 15. 5. 2023
Vedoucí: Ing. Martina Janošíková, Ph.D.
Oponent: Ondřej Šimoník, externi

Citační záznam

Citovat tuto práci

Citace dle ISO 690:

POKORNÁ, Pavla. \textit{Porovnání vlivu rychlosti chlazení a~mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat}. Online. Diplomová práce. Praha: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů. 2023. Dostupné z: https://theses.cz/id/ehfwxk/.

@MastersThesis{Pokorna2023thesis,
AUTHOR = "Pokorná, Pavla",
TITLE = "Porovnání vlivu rychlosti chlazení a mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat [online]",
YEAR = "2023 [cit. 2024-07-05]",
TYPE = "Diplomová práce",
SCHOOL = "Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojůPraha",
NOTE = "SUPERVISOR: Ing. Martina Janošíková, Ph.D.",
URL = "https://theses.cz/id/ehfwxk/",
}

@MastersThesis{Pokorna2023thesis,
AUTHOR = {Pokorná, Pavla},
TITLE = {Porovnání vlivu rychlosti chlazení a mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat},
YEAR = {2023},
TYPE = {Diplomová práce},
INSTITUTION = {Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů},
LOCATION = {Praha},
SUPERVISOR = {Ing. Martina Janošíková, Ph.D.},
URL = {https://theses.cz/id/ehfwxk/},
URL_DATE = {2024-07-05},
}

{{Citace kvalifikační práce
 | příjmení = Pokorná
 | jméno = Pavla
 | instituce = Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů
 | titul = Porovnání vlivu rychlosti chlazení a mrazení na kvalitu inseminační dávky hospodářských zvířat
 | url = https://theses.cz/id/ehfwxk/
 | typ práce = Diplomová práce
 | vedoucí = Ing. Martina Janošíková, Ph.D.
 | rok = 2023
 | počet stran =
 | strany =
 | citace = 2024-07-05
 | poznámka =
 | jazyk = 
}}

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Zveřejněno v Theses:

světu

Jak jinak získat přístup k textu

Instituce archivující a zpřístupňující práci: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Odkaz na adresář do lokálního úložiště instituce

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / specializace:
Biotechnologie / Reprodukční biotechnologie

Práce na příbuzné téma

Srovnání komerčních ředidel a jejich kombinací za účelem zlepšení kryokonzervačních schopností u spermatu beranů valašské ovce
Johana Uhlířová
Vliv ředidla ejakulátu býků na životaschopnost kryokonzervovaných inseminačních dávek hodnocenou průtokovou cytometrií
Simona Doležalová
Vliv typu ředidla ejakulátu na kvalitu inseminační dávky
Kateřina Šperlová
Vliv ředidla ejakulátu býků na životaschopnost kryokonzervovaných inseminačních dávek hodnocenou průtokovou cytometrií
Simona Doležalová
Vliv ředidla ejakulátu býků na následnou oplozovací schopnost krátkodobě konzervovaných inseminačních dávek
Simona Doležalová
Přídavek specifických látek do ředidla ejakulátu býků a změny jeho parametrů
Adéla Polánská
Porovnání komerčních a modifikovaných ředidel pro konzervaci ejakulátu u vybraných genových zdrojů hospodářských zvířat
Michaela Králová
Porovnání ředidel pro ejakulát býků ve vztahu k přežitelnosti spermií
Petra Neužilová

Všechny práce

Název

Vložil

Vloženo

Práva

Theses ehfwxk ehfwxk/2

16. 4. 2023

Složky

Soubory

thesis zaverecna_prace.pdf_

Mach, J.