Protinádorová aktivita cytokininů – Bc. Jiří SKOŘEPA

Anotace:

A. Vypracovat rešerši literatury zabývající se biologickou aktivitou cytokininů, zejména protinádorovou aktivitou. Dále vytvořit stručný přehled mechanismů indukce a regulace apoptózy. B. Pomocí westernového přenosu a imunoblotingu zhodnotit efekt přirozených cytotoxických cytokinových ribosidů na koncentrace vybraných proteinů hrajících roli v apoptose v buňkách vysoce citlivé linie CCRF-CEM nesoucí mutace v obou alelách genu p53. C. Charakterizovat cytoxickou aktivitu osmi vysoce aktivních syntetických derivátů N6-benzyladenosinu substituovaných na benzenovém jádře halogenovou skupinou a/nebo 2-hydroxyskupinou vůči stejné linii a srovnat ji s klasickými aromatickými cytokininy. Hodnoceny budou tyto parametry: - cytotoxicita po 72 hodinách a předpokládaný protektivní efekt inhibitoru adenosin kinasy (kalceinový test) - vliv na koncentraci ATP (luminometrická detekce) - efekt na permeabilitu buněčné membrány (průtoková cytometrie buněk barvenýchpropidium jodidem) - metabolizace na 5'-monofosfáty (kapilární elektroforéza) …víceméně

Abstract:

A. It was written out rewiev of literature about biological activity of cytokinin, especially anticancer activity. It was made a brief overwiev of induction mechanism and regulation of apoptosis. B. Effect of natural cytotoxic cytokinin ribosides to concentration of chosen proteins which play role in apoptosis. Highly sensitive cell line CCRF-CEM (it has mutation in booth allels for p53) was evaluated by western blotting C. Activity of 8 highly active synthetic derivatives of N6-benzyladenosine with halogen and/or 2-hydroxy substituents on benzen ring was characterized and evaluated according to clasic aromatic cytokinins. Same cell line was used. I evaluated these parameters: - cytotoxicity after 72 hours and epected protective effect of inhibitor of adenosine kinase (calcein test) - influence on the ATP concentration (luminimetric detection) - effect on cell membrane permeability (flow cytometry, cells was dyed by propidium iodide) - metabolism of 5'-monophosphates (capilary electrophoresis) …víceméně