Izolace cytokininů z tRNA – Věra DOSEDĚLOVÁ

Anotace:

Teoretická část bakalářské práce je věnována fytohormonům, především biosyntéze cytokininů. Dále jsou popsány metody sekvenování DNA, typy RNA a funkce cytokininů v tRNA. Experimentální část je zaměřena na screening volných aromatických cytokininů metodou LC-MS v listech z topolů, izolaci tRNA a analýzu tRNA cytokininů. Sreeningem bylo zjištěno, že aromatický cytokinin ortho-topolin ribosid se vyskytuje v listech všech 13 vybraných klonů rodu Populus, a to v koncentračním rozmezí 0,2-443,1 pmol/g čerstvé hmoty. Volná báze ortho-topolin byla detekována pouze u 7 klonů, a to v koncentračním rozmezí 0,9-169,4 pmol/g čerstvé hmoty. Dále byl stanoven obsah ortho-topolin ribosidu v tRNA izolované z listů klonu P. deltoides, vybraného podle nejvyššího obsahu volných aromatických cytokininů. Izolovaná tRNA byla podrobena alkalické hydrolýze, kde průměrná koncentrace oTR byla 0,33 ng/g tRNA. Množství cis-zeatin ribosidu bylo vzhledem k oTR poloviční a N6-isopentenyladenosinu pětinové. Závěrem byl změřen časový profil aromatických cytokininů mezi pátou a jedenáctou hodinou. Ukázalo se, že hladina volných cytokininů je nejvyšší v devět hodin, zatímco vázané v tRNA ve sledovaném časovém rozmezí stále zůstávaly na bazální úrovni. …víceméně

Abstract:

Theoretical part of this bachelor thesis deals phytohormones, especially cytokinin biosynthesis. Further DNA sequencing, types of RNA and functions of cytokinins in tRNA are described. Experimental part is focused on screening of free aromatic cytokinins in poplar leaves by LC-MS method, tRNA isolation and analysis of tRNA cytokinins. By screening it was discovered that aromatic cytokinin ortho-topolin riboside occurred in leaves of all 13 chosen clones of Populus genus in concentration range 0,2-443,1 pmol/g fresh weight. Free base ortho-topolin was detected only in 7 clones in concentration range 0,9-169,4 pmol/g fresh weight. Next the amount of ortho-topolin riboside in tRNA isolated from leaves of P. deltoides chosen due to the highest amount of free aromatic cytokinins was determined. Isolated tRNA was submitted to alkaline hydrolysis, where an average concenteration of oTR was 0,33 ng/g tRNA. Amount of cis zeatin riboside was half given oTR and amount of N6-isopentenyladenosine was one-fifth. At the end time profile between nine and eleven o´clock was measured. It was proved that level of free aromatic cytokinins was highest at nine o´clock, while bound in tRNA remained on basal level. …víceméně