Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců

Sedláčková, Michaela

EN SKPřihlásit se Přihlásit se (EduID)

Theses lxdwpw

Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců – Bc. Michaela Sedláčková

Bc. Michaela Sedláčková

Diplomová práce

Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců

Distribution of spermadhesins in the protein profile of boar ejaculate

Anotace:

Kančí ejakulát je složen ze spermií a semenné plazmy (SP). SP je tekutina pocházející z přídatných pohlavních žláz samců a spermie se s ní dostávají do kontaktu během ejakulace. SP má za úkol zajišťovat ochranu, výživu a transport spermií při jejich pobytu v samičím reprodukčním traktu. Významnou složkou SP jsou proteiny, které se během ejakulace spermií adherují na jejich povrch a mohou hrát roli jako dekapacitační faktory, jelikož zabraňují předčasné kapacitaci spermií. Významný podíl proteinů SP kanců tvoří spermadhesiny, které hrají klíčovou roli v následných dějích vedoucích k úspěšnému oplození. Tvoří především ochranný obal na povrchu spermií a zprostředkovávají vazbu spermií do oviduktálního rezervoáru samice. Navíc se pravděpodobně účastní také interakce spermie s oocytem. Cílem této diplomové práce bylo zjistit, zda se množství spermadhesinů, a to konkrétně AQN a AWN spermadhesinů, v ejakulátu jednotlivých kanců bude lišit, a proto byl sledován proteinový profil SP a spermií včetně cílené izolace proteinů z jejich povrchu u vybraných jedinců s následnou detekcí AQN a AWN spermadhesinů pomocí protilátek. Výskyt spermadhesinů v SP kanců byl potvrzen v molekulové hmotnosti kolem 11-19 kDa ve vzorcích SP, lyzátech spermií i povrchových proteinech spermií. Navíc byla prokázána i přítomnost jejich agregovaných forem. Mezi jednotlivými kanci byly zjištěny individuální rozdíly, jelikož u poměru síly signálu protilátky proti AQN k naměřené koncentraci proteinů v SP byl zjištěn statisticky významný rozdíl (p<0,05). Stejně tak byl zjištěn u relativní optické denzity poměru signálu protilátky proti AQN i AWN spermdhesinu vztažené ke koncentraci spermií. V případě neprokázání statisticky významného rozdílu pomocí denzitometrické analýzy byla však mezi kanci vidět také určitá individualita v množství detekovaných proteinů. Pomocí imunofluorescenční mikroskopie byly spermadhesiny lokalizovány na kančích ejakulovaných spermiích fixovaných aceton/metanolem především v oblasti akrozomální čepičky, krčku a střední části bičíku, zatímco spermadhesiny na ejakulovaných spermiích připravených v suspenzi byly pomocí protilátky lokalizovány na povrchu celé hlavičky i bičíku spermie. I když u vzorků jednotlivých kanců byla v množství navázaných AQN a AWN spermadhesinů patrná individualita mezi nimi, je nutné se do budoucna zaměřit na detailnější popis funkčích parametrů spermií, aby byla jasně prokázána souvislost mezi množstvím spermadhesinů v ejakulátu kanců a jejich fertilizační schopností. …více

Abstract:

Boar ejaculate is composed of sperm and seminal plasma (SP). SP is a fluid that comes from the male accessory glands, and spermatozoa come into contact with it during ejaculation. SP has the task of ensuring the protection, nutrition and transport of spermatozoa during their stay in the female reproductive tract. An important component of SP are proteins that adhere to the surface of sperm during ejaculation and can play a role as decapacitation factors, as they prevent premature capacitation of sperm. A significant portion of boar SP proteins are spermadhesins, which play a key role in subsequent events leading to successful fertilization. They primarily form a protective coating on the sperm surface and mediate the binding of sperm to the oviductal reservoir of the female. In addition, they participate in the sperm-oocyte interaction. The aim of this thesis was to find out whether the amount of spermadhesins, specifically AQN and AWN spermadhesins, in the ejaculate of individual boars will differ, and therefore the protein profile of SP and sperm was monitored, including the targeted isolation of proteins from their surface in selected individuals with subsequent detection of AQN and AWN of spermadhesins using antibodies. The occurrence of spermadhesins in boar SP was confirmed at a molecular weight of around 12-18 kDa in SP samples, sperm lysates and sperm surface proteins. In addition, the presence of their aggregated forms was also proven. Individual differences were found between individual boars, as a statistically significant difference (p<0.05) was found in the ratio of the antibody signal against AQN to the measured protein concentration in the SP. It was also found in the relative optical density of the signal ratio of the antibody against AQN and AWN spermdhesin related to sperm concentration. In the case of not showing a statistically significant difference using densitometric analysis; however, a certain individuality in the amount of detected proteins was also seen between the boars. Using immunofluorescence microscopy, spermadhesins were localized on boar ejaculated spermatozoa fixed with acetone/methanol mainly in the region of the acrosomal cap, the neck and the midpice of the flagellum, while spermadhesins on ejaculated spermatozoa prepared in suspension were localized using an antibody on the surface of the entire sperm head and flagellum. Even though in the samples of individual boars the amount of bound AQN and AWN spermadhesins showed individuality between them, in the future it is necessary to focus on a more detailed description of the functional parameters of sperm in order to clearly demonstrate the connection between the amount of spermadhesins in the ejaculate of boars and their fertilization ability. …více

Klíčová slova

semenná plazma protilátka povrchové proteiny Western blot

Keywords

seminal plasma antibody surface proteins Western blot

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 16. 4. 2023

Obhajoba závěrečné práce

Obhajoba proběhla 16. 5. 2023
Vedoucí: RNDr. Pavla Postlerová, Ph.D.
Oponent: Jana Antalíková, externi

Citační záznam

Citovat tuto práci

Citace dle ISO 690:

SEDLÁČKOVÁ, Michaela. \textit{Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců}. Online. Diplomová práce. Praha: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů. 2023. Dostupné z: https://theses.cz/id/lxdwpw/.

@MastersThesis{Sedlackova2023thesis,
AUTHOR = "Sedláčková, Michaela",
TITLE = "Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců [online]",
YEAR = "2023 [cit. 2024-07-30]",
TYPE = "Diplomová práce",
SCHOOL = "Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojůPraha",
NOTE = "SUPERVISOR: RNDr. Pavla Postlerová, Ph.D.",
URL = "https://theses.cz/id/lxdwpw/",
}

@MastersThesis{Sedlackova2023thesis,
AUTHOR = {Sedláčková, Michaela},
TITLE = {Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců},
YEAR = {2023},
TYPE = {Diplomová práce},
INSTITUTION = {Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů},
LOCATION = {Praha},
SUPERVISOR = {RNDr. Pavla Postlerová, Ph.D.},
URL = {https://theses.cz/id/lxdwpw/},
URL_DATE = {2024-07-30},
}

{{Citace kvalifikační práce
 | příjmení = Sedláčková
 | jméno = Michaela
 | instituce = Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů
 | titul = Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců
 | url = https://theses.cz/id/lxdwpw/
 | typ práce = Diplomová práce
 | vedoucí = RNDr. Pavla Postlerová, Ph.D.
 | rok = 2023
 | počet stran =
 | strany =
 | citace = 2024-07-30
 | poznámka =
 | jazyk = 
}}

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Zveřejněno v Theses:

světu

Jak jinak získat přístup k textu

Instituce archivující a zpřístupňující práci: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Odkaz na adresář do lokálního úložiště instituce

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / specializace:
Biotechnologie / Reprodukční biotechnologie

Práce na příbuzné téma

Ovlivnění mrazitelnosti ejakulátu hřebců s využitím přídavku semenné plazmy a jejích proteinů
Filipa Bubeníčková
Vliv přídavku proteinových frakcí semenné plazmy na motilitu hřebčích spermií
Daniela Nová
Interakce proteinů semenné plazmy a spermií ve vztahu k hladině testosteronu býků a kanců
Zuzana Kauerová

Název

Vložil

Vloženo

Práva

Theses lxdwpw lxdwpw/2

15. 4. 2023

Složky

Soubory

thesis zaverecna_prace.pdf_

Mach, J.

16. 4. 2023

Co je jinak přidání souboru

Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
Co je jinak další operace se soubory

Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
Co je jinak pohled pro experty

Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
Co je nové vyhledávání souborů

Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
Co je nové rychlý přístup k souborům

Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.
Co se chystá

Připravujeme další vylepšení pro mobilní zařízení.

Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců – Bc. Michaela Sedláčková

Bc. Michaela Sedláčková

Diplomová práce

Podíl spermadhesinů v proteinovém profilu ejakulátu kanců

Distribution of spermadhesins in the protein profile of boar ejaculate

Anotace:

Abstract:

Klíčová slova

Keywords

Obhajoba závěrečné práce

Citační záznam

Citace dle ISO 690:

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Jak jinak získat přístup k textu

Česká zemědělská univerzita v Praze

Práce na příbuzné téma

Složky

Soubory

Co je jinak přidání souboru

Co je jinak další operace se soubory

Co je jinak pohled pro experty

Co je nové vyhledávání souborů

Co je nové rychlý přístup k souborům

Co se chystá