3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete

Šmídová, Tereza

EN SKPřihlásit se Přihlásit se (EduID)

Theses t05ayc

3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete – Bc. Tereza Šmídová

Bc. Tereza Šmídová

Diplomová práce

3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete

3D culture system with GrowDex for cumulus-oocytes complexes cultivation

Anotace:

Kultivační systémy využívající trojrozměrné (3D) prostředí představují pokročilý přístup v buněčné kultivaci, jelikož lépe odrážejí přirozené prostředí buněk a podporují jejich vývoj. Cílem diplomové práce bylo srovnat 3D kultivační systém pro dlouhodobou kultivaci oocyty obklopujících buněk prasete využívající celulózový hydrogel GrowDex se standardním 2D kultivačním prostředím z pohledu exprese vybraných markerů apoptózy. Ve 3D kultivačním prostředí s přídavkem hydrogelu GrowDex v různé koncentraci (1 a 0,5 %) bylo nejprve hodnoceno jaderné zrání kumulo-oocytárních komplexů (COCs) prasete. Oocyty kultivované v kultivačním médiu M199 s přídavkem hydrogelu GrowDex (3D) v obou použitých koncentracích vykazovaly srovnatelné výsledky jaderného zrání s kontrolou (2D). Kumulární buňky z oocytů ve stádiu druhé meiotické metafáze byly poté ve 3D a standardním kultivačním prostředí (2D) ponechány k dlouhodobé kultivaci po dobu 2, 4, 7 a 16 dní. Na základě exprese markerů apoptózy byl hodnocen vitální stav kultivovaných buněk. Markery apoptózy byly zjišťovány pomocí imunodetekce metodou Western blot. Hodnocena byla míra exprese anti-apoptotického proteinu Bcl-2 a pro-apoptotického proteinu Bax z rodiny proteinů Bcl-2, jejíž členové jsou schopní regulovat propustnost mitochondriální membrány pro cytochrom c a jsou zásadní pro celý proces vnitřní apoptotické dráhy. Síla signálu reakce proteinu s protilátkou na membráně byla hodnocena na základě parametru integrované optické denzity (IOD), která se rovná součinu průměrné optické denzity a plochy, kde proběhla reakce proteinu s protilátkou. Stanovené hodnoty byly následně vztaženy k IOD referenčního proteinu tubulinu, který se vyskytuje ve všech typech buněk a takto byla získána relativní integrovaná optická denzita (RIOD). Proteiny Bcl-2 i Bax byly pomocí imunodetekce nalezeny ve všech kategoriích dlouhodobě kultivovaných buněk. Míra exprese proteinů ze skupiny Bcl-2 v kumulárních buňkách byla hodnocena po různé době kultivace, a to jak z 2D, tak z 3D kultivačního prostředí s přídavkem hydrogelu GrowDex. Hypotéza, že ve 3D kultivačním systému bude vyšší exprese anti-apoptotického proteinu, a naopak nižší exprese pro-apoptotického proteinu nebyla potvrzena. Anti-apoptotický protein Bcl-2 nevykazoval statisticky významou vyšší míru exprese ve 3D systému s GrowDex oproti 2D prostředí. Jediný významný rozdíl byl zjištěn v délce kultivace do 16 dní. Ani předpokládaná nižší exprese pro-apoptotického proteinu Bax ve 3D systému s GrowDex nebyla statisticky prokázána, a to v žádné z kategorií hodnocených kumulárních buněk. Z pohledu exprese markerů apoptózy i výsledků jaderného zrání jsou oba kultivační systémy srovnatelné. V budoucích experimentech by bylo vhodné zaměřit se na další 3D kultivační systémy a detekci nových markerů, jako jsou markery proliferace a diferenciace. …více

Abstract:

Culture systems using three-dimensional (3D) environment represent an advanced approach in cell culture, as they better reflect the natural environment of cells and support their development. The aim of the diploma thesis was to compare a 3D culture system for long-term cultivation of porcine oocyte-surrounding cells using cellulose hydrogel GrowDex with a standard 2D culture medium in terms of expression of selected markers of apoptosis. Nuclear maturation of cumulus-oocytes complexes (COCs) in a 3D culture medium with the addition of GrowDex hydrogel at various concentrations (1 and 0.5%) was first evaluated. Oocytes cultured in M199 culture medium supplemented with GrowDex hydrogel (3D) at all used concentrations showed comparable nuclear maturation results to the control (2D). Cumulus cells from the oocytes in the second meiotic metaphase stage were then left in long-term culture in 3D and standard culture medium (2D) for 2, 4, 7 and 16 days. Based on the expression of markers of apoptosis, the vital status of cultured cells was assessed. Markers of apoptosis were detected by Western blot immunodetection. The expression levels of the anti-apoptotic protein Bcl-2 and the pro-apoptotic protein Bax from the Bcl-2 family of proteins, whose members are able to regulate the permeability of the mitochondrial membrane to cytochrome c and are essential for the whole process of the intrinsic apoptotic pathway, were evaluated. The strength of the protein-antibody reaction signal on the membrane was evaluated based on the integrated optical density (IOD) parameter, which is equal to the product of the average optical density and the area where the protein-antibody reacted. The determined values were then related to the IOD of the reference protein tubulin, which occurs in all cell types, and the relative integrated optical density (RIOD) was obtained. Both Bcl-2 and Bax proteins were found by immunodetection in all categories of long-term cultured cells. The level of expression of Bcl-2 family proteins in cumulus cells was evaluated after different cultivation times, both from 2D and 3D culture medium with the addition of GrowDex hydrogel. The hypothesis that in the 3D culture system there will be a higher expression of the anti-apoptotic protein and, conversely, a lower expression of the pro-apoptotic protein was not confirmed. The anti-apoptotic protein Bcl-2 did not show a statistically significant higher expression rate in the 3D system with GrowDex compared to the 2D environment. The only significant difference was found in the length of cultivation up to 16 days. The presumed lower expression of the pro-apoptotic protein Bax in the 3D system with GrowDex was not statistically proven in any of the categories of cumulus cells. From the point of view of the expression of apoptotic markers and the results of nuclear maturation, both culture systems are comparable. In future experiments, it would be possible to focus on other 3D culture systems and detect other markers, such as markers of proliferation and differentiation. …více

Klíčová slova

prase kumulo-oocytární komplexy kultivace markery apoptózy 3D systém detekce proteinů

Keywords

3D system protein detection cumulus-oocyte complexes cultivation apoptotic markers pig

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 26. 4. 2021

Obhajoba závěrečné práce

Vedoucí: doc. Ing. Eva Chmelíková, Ph.D.

Citační záznam

Citovat tuto práci

Citace dle ISO 690:

ŠMÍDOVÁ, Tereza. \textit{3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete}. Online. Diplomová práce. Praha: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů. 2021. Dostupné z: https://theses.cz/id/t05ayc/.

@MastersThesis{Smidova2021thesis,
AUTHOR = "Šmídová, Tereza",
TITLE = "3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete [online]",
YEAR = "2021 [cit. 2024-06-30]",
TYPE = "Diplomová práce",
SCHOOL = "Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojůPraha",
NOTE = "SUPERVISOR: doc. Ing. Eva Chmelíková, Ph.D.",
URL = "https://theses.cz/id/t05ayc/",
}

@MastersThesis{Smidova2021thesis,
AUTHOR = {Šmídová, Tereza},
TITLE = {3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete},
YEAR = {2021},
TYPE = {Diplomová práce},
INSTITUTION = {Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů},
LOCATION = {Praha},
SUPERVISOR = {doc. Ing. Eva Chmelíková, Ph.D.},
URL = {https://theses.cz/id/t05ayc/},
URL_DATE = {2024-06-30},
}

{{Citace kvalifikační práce
 | příjmení = Šmídová
 | jméno = Tereza
 | instituce = Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů
 | titul = 3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete
 | url = https://theses.cz/id/t05ayc/
 | typ práce = Diplomová práce
 | vedoucí = doc. Ing. Eva Chmelíková, Ph.D.
 | rok = 2021
 | počet stran =
 | strany =
 | citace = 2024-06-30
 | poznámka =
 | jazyk = 
}}

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Zveřejněno v Theses:

světu

Jak jinak získat přístup k textu

Instituce archivující a zpřístupňující práci: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Odkaz na adresář do lokálního úložiště instituce

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Biotechnologie / Reprodukční biotechnologie

Práce na příbuzné téma

Tau protein - analytické a obohacovací techniky pro detekci markeru Alzheimerovy choroby
Hana Mašátová
Mikrofluidní kultivační systém pro 3D buněčné kultury
Vojtěch TRNKA
3D kultivace buněk
Anna Košková
3D kultivace kmenových buněk v mikrofluidních systémech
Vojtěch Hradil
Studium interakce hostitel - patogen na modelu prase - salmonela
Kamila Kýrová

Název

Vložil

Vloženo

Práva

Theses t05ayc t05ayc/2

28. 4. 2021

Složky

Soubory

thesis zaverecna_prace.pdf

Mach, J.

28. 4. 2021

Co je jinak přidání souboru

Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
Co je jinak další operace se soubory

Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
Co je jinak pohled pro experty

Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
Co je nové vyhledávání souborů

Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
Co je nové rychlý přístup k souborům

Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.
Co se chystá

Připravujeme další vylepšení pro mobilní zařízení.

3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete – Bc. Tereza Šmídová

Bc. Tereza Šmídová

Diplomová práce

3D kultivační systém využívající GrowDex pro kultivaci kumulo-oocytárních komplexů prasete

3D culture system with GrowDex for cumulus-oocytes complexes cultivation

Anotace:

Abstract:

Klíčová slova

Keywords

Obhajoba závěrečné práce

Citační záznam

Citace dle ISO 690:

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Jak jinak získat přístup k textu

Česká zemědělská univerzita v Praze

Práce na příbuzné téma

Složky

Soubory

Co je jinak přidání souboru

Co je jinak další operace se soubory

Co je jinak pohled pro experty

Co je nové vyhledávání souborů

Co je nové rychlý přístup k souborům

Co se chystá