Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi

Vedralová, Petra

EN SKPřihlásit se Přihlásit se (EduID)

Theses uxofnt

Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi – Bc. Petra Vedralová

Bc. Petra Vedralová

Diplomová práce

Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi

Holding of mammalian oocytes in commercial embryo holding medium.

Anotace:

Cílem této práce bylo ověřit hypotézu, že si savčí oocyty zachovají vývojovou kompetenci i po uchování v 17°C v manipulačním médiu pro embrya. Pro experiment byly použity vaječníky, které byly získány od pohlavně dospělých krav a prepubertálních prasniček poražených na lokálních jatkách. Po jejich převozu byly aspirovány oocyty z preantrálních folikulů. Zatímco první skupina oocytů byla kultivována ihned po aspiraci (kontrolní skupina), druhá skupina oocytů byla nejdříve ponechána po dobu 18-24 hodin v termoboxu při 17°C v 1 ml BoviHold médiu (holding medium pro bovinní embrya) a poté byly oocyty kultivovány (experimentální skupina). Kultivace oocytů vždy proběhla v inkubátoru při 38,2°C, 5% obsahu CO2 a 95% vlhkosti. U bovinních oocytů inkubace trvala 24 h a u prasečích 48 hodin.V první části experimentu bylo u oocytů hodnoceno jaderné zrání s použitím Vectashield Antifade Mounting Medium s DAPI, kdy se stanovovalo procentuální zastoupení oocytů ve stádiu zárodečného váčku, metafáze I a metafáze II. V druhé části experimentu se u oocytů po vyhodnocení jaderného zrání detekovaly buněčné formy reaktivního kyslíku (ROS) s použitím DCFDA (H2DCFDA (2’,7’ – dichlorofluorescin diacetate)) na základě intenzity fluorescence. V obou skupinách hodnocených prasečích oocytů dozrálo do stádia metafáze II 86,7 % oocytů. Bovinní oocyty uchované v BoviHold médiu dosáhly druhé metafáze v 90,3 %, což bylo ještě asi o 5 % více než ve skupině kontrolní. Mezi hodnocenými skupinami nebyl zjištěn žádný statisticky významný rozdíl (P > 0,05). V případě hodnocení ROS v experimentální skupině prasečích oocytů byla oproti kontrolní skupině naměřena průměrná intenzita fluorescence o 55 % vyšší, u bovinních oocytů v experimentální skupině byl oproti kontrolní skupině zjištěn nárůst intenzity fluorescence o 35 %. Experimentem byl tedy u oocytů zjištěn statisticky významný rozdíl v průměrné intenzitě fluorescence (P < 0,05) mezi kontrolními a experimentálními skupinami prasečích a bovinních oocytů. Avšak při vzájemném porovnávání experimentálních skupin u prasečích a bovinních oocytů nebyl zjištěn žádný statisticky významný rozdíl v relativní intenzitě fluorescence (P > 0,05). U obou druhů byla v experimentálních skupinách naměřena vyšší relativní průměrná intenzita. Tím se potvrdilo tvrzení, že čím déle bude s oocyty manipulováno v in vitro podmínkách, tím budou hladiny ROS narůstat.Experimentem bylo prokázáno, že prasečí i bovinní oocyty byly i po několikahodinovém skladování za snížených teplot stále životaschopné a dozrávaly do metafáze II. Také bylo zjištěno, že skladování oocytů v holding médiu, zvyšuje hladinu ROS v cytoplazmě. Jako další postup v této oblasti in vitro produkce embryí lze doporučit experimenty týkající se in vitro fertilizace takto skladovaných oocytů, čímž lze odpovědět na otázku, zda se mohou tyto oocyty vyvinout do stádia blastocysty. …více

Abstract:

The aim of this work was to verify the hypothesis that mammalian oocytes retain developmental competence even after storage at 17 ° C in embryo manipulation medium. The ovaries were used for the experiment, which were obtained from sexually mature cows and prepubertal gilts slaughtered in local slaughterhouses. Oocytes from preantral follicles were aspirated after their transport. While the first group of oocytes was cultivated immediately after aspiration (control group), the second group of oocytes was first left for 18-24 hours in a thermobox at 17 ° C in 1 ml of BoviHold media (holding medium for bovine embryos) and then the oocytes were cultured experimental group). Oocyte culture was always incubated at 38.2 ° C, 5% CO2 and 95% humidity. Bovine oocytes were incubated for 24 hours and for pigs 48 hours.In the first part of the experiment, nuclear maturation was evaluated for oocytes using the Vectashield Antifade Mounting Medium with DAPI, where the percentage of oocytes in the stage of the embryo, metaphase I and metaphase II was determined. In the second part of the experiment, the reactive oxygen cellular forms (ROS) using DCFDA (H2DCFDA (2 ', 7'-dichlorofluorescin diacetate)) were detected in oocytes after evaluation of nuclear maturation based on the fluorescence intensity. In both groups of evaluated pig oocytes, 86.7% of the oocytes matured into the metaphase II stage. Bovine oocytes retained in BoviHold medium reached the second metaphase at 90.3%, which was still about 5% more than in the control group. No statistically significant difference (P> 0.05) was found between the groups evaluated.In the case of the ROS evaluation in the experimental group of pig oocytes, the mean fluorescence intensity was 55% higher than that of the control group, the bovine oocytes in the experimental group showed an increase in fluorescence by 35% compared to the control group. Thus, the oocyte found a statistically significant difference in mean fluorescence intensity (P <0.05) between control and experimental groups of pig and bovine oocytes. However, in the comparison of experimental groups in pigs and bovine oocytes, no statistically significant difference in relative fluorescence intensity (P> 0.05) was found. For both species, higher relative mean intensity was measured in the experimental groups. This confirms the claim that the longer the oocytes will be manipulated in in vitro conditions, the ROS levels will increase.The experiment has shown that both porcine and bovine oocytes were still viable after several hours of storage under reduced temperatures and matured in metaphase II. It has also been found that the storage of oocytes in the holding medium increases the level of ROS in the cytoplasm. As a further step in this field of in vitro embryo production, experiments concerning in vitro fertilization of oocytes stored in this way can be recommended to answer the question of whether these oocytes can develop into blastocysts. …více

Klíčová slova

folikul in vitro zrání oocyt aspirace

Keywords

aspiration follicle in vitro maturation oocyte

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 4. 2018

Obhajoba závěrečné práce

Vedoucí: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Citační záznam

Citovat tuto práci

Citace dle ISO 690:

VEDRALOVÁ, Petra. \textit{Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi}. Online. Diplomová práce. Praha: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů. 2018. Dostupné z: https://theses.cz/id/uxofnt/.

@MastersThesis{Vedralova2018thesis,
AUTHOR = "Vedralová, Petra",
TITLE = "Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi [online]",
YEAR = "2018 [cit. 2024-06-30]",
TYPE = "Diplomová práce",
SCHOOL = "Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojůPraha",
NOTE = "SUPERVISOR: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.",
URL = "https://theses.cz/id/uxofnt/",
}

@MastersThesis{Vedralova2018thesis,
AUTHOR = {Vedralová, Petra},
TITLE = {Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi},
YEAR = {2018},
TYPE = {Diplomová práce},
INSTITUTION = {Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů},
LOCATION = {Praha},
SUPERVISOR = {Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.},
URL = {https://theses.cz/id/uxofnt/},
URL_DATE = {2024-06-30},
}

{{Citace kvalifikační práce
 | příjmení = Vedralová
 | jméno = Petra
 | instituce = Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů
 | titul = Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi
 | url = https://theses.cz/id/uxofnt/
 | typ práce = Diplomová práce
 | vedoucí = Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.
 | rok = 2018
 | počet stran =
 | strany =
 | citace = 2024-06-30
 | poznámka =
 | jazyk = 
}}

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Zveřejněno v Theses:

světu

Jak jinak získat přístup k textu

Instituce archivující a zpřístupňující práci: Česká zemědělská univerzita v Praze, Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Odkaz na adresář do lokálního úložiště instituce

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Biotechnologie / Reprodukční biotechnologie

Práce na příbuzné téma

Charakterizace inhibiční aktivity derivátů bevirimatu na maturaci HIV-1 in vitro
Markéta Brodinová
Zrání bovinních oocytů in vitro
Kristýna Tuťálková
Redistribuce sialové kyseliny během meiotického zrání prasečích oocytů v in vitro podmínkách.
Zuzana Hedbávná
Redistribuce sialové kyseliny během meiotického zrání prasečích oocytů v in vitro podmínkách.
Zuzana Hedbávná
Gasotransmitery a možnosti jejich stanovení v oocytech kultivovaných v in vitro podmínkách
Aurélia Víghová
Úloha sirtuinů během formace prvojader po in vitro oplození prasečích oocytů
Veronika Maryníková
Lokalizace vybraných sacharidových struktur během meiotického zrání prasečích oocytů kultivovaných in vitro.
Karolína Litošová
Markery zrání savčích oocytů in vitro -- vliv endokrinního disruptoru bisfenolu S
Šárka Prokešová

Všechny práce

Název

Vložil

Vloženo

Práva

Theses uxofnt uxofnt/2

14. 4. 2018

Složky

Soubory

thesis zaverecna_prace.pdf

Mach, J.

14. 4. 2018

Co je jinak přidání souboru

Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
Co je jinak další operace se soubory

Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
Co je jinak pohled pro experty

Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
Co je nové vyhledávání souborů

Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
Co je nové rychlý přístup k souborům

Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.
Co se chystá

Připravujeme další vylepšení pro mobilní zařízení.

Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi – Bc. Petra Vedralová

Bc. Petra Vedralová

Diplomová práce

Uchování savčích oocytů v komerčních médiích pro manipulaci s embryi

Holding of mammalian oocytes in commercial embryo holding medium.

Anotace:

Abstract:

Klíčová slova

Keywords

Obhajoba závěrečné práce

Citační záznam

Citace dle ISO 690:

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Jak jinak získat přístup k textu

Česká zemědělská univerzita v Praze

Práce na příbuzné téma

Složky

Soubory

Co je jinak přidání souboru

Co je jinak další operace se soubory

Co je jinak pohled pro experty

Co je nové vyhledávání souborů

Co je nové rychlý přístup k souborům

Co se chystá