Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes

BESTA SMRČKOVÁ, Helena

EN SKPřihlásit se Přihlásit se (EduID)

Theses.cz

Theses vmdygd

Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes – Bc. Helena BESTA SMRČKOVÁ

Bc. Helena BESTA SMRČKOVÁ

Diplomová práce

Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes

Role of PD1 and tyrosine phosphatase 2 (SHP-2) activity on Lck activity in human T lymphocytes

Abstract:

T-cell exhaustion, characterized by the upregulation of immune checkpoints such as Programmed cell death protein 1 (PD-1) and its ligand PD-L1, severely limits the efficacy of the adaptive immune response in settings of chronic antigen exposure. Overcoming this exhaustion and restoring T-cell effector function requires precise pharmacological modulation of intracellular signaling pathways, specifically targeting molecules like the Lck kinase and SHP-2 phosphatase. This study aimed to evaluate the in vitro effects of various targeted pharmacological inhibitors, specifically Dasatinib, tyrosine kinase inhibitors (TPI-1 and PTP1Bi) and CuET, administered individually and in multidrug combinations, on PD-1 and PD-L1 expression, as well as on Lck phosphorylation in human T-lymphocytes and their cytotoxic function. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated from healthy human donors, and subsequently cultivated and subjected to either pharmacological stimulation (PMA/ionomycin) or receptor-mediated stimulation (Phytohemagglutinin, PHA). The modulation of PD-1 and PD-L1 surface expression was quantified using flow cytometry. Additionally, cytotoxic activity of treated T-lymphocytes against 2D cancer cell cultures was assessed. Concurrently, the phosphorylation status of Lck at specific residues (Tyr394, Tyr192, and Tyr505) were assessed via Western blot analysis. Flow cytometric analysis revealed highly stimulation-dependent responses. In the PMA/ionomycin cohort, treatments with Dasatinib, TPI-1, and the combination of Dasatinib + TPI-1 + PTP1Bi led to a statistically significant downregulation of single-positive PD-L1 expression, while simultaneously increasing the PD-1+/PD-L1+ double-positive cell population. In the PHA cohort, the combinatory treatment of CuET + TPI-1 significantly upregulated single-positive PD-1 expression. Western blot analysis demonstrated that cellular stimulation successfully induced PD-1 expression alongside Lck phosphorylation. Dasatinib consistently abrogated Lck phosphorylation across the tested conditions. Cytotoxicity assays revealed distinct cell-line-specific responses. A549 and K562 showed no significant changes across treatments. On the other hand, cytotoxicity broadly increased in Jurkat (Dasatinib+TPI-1, CuET, TPI-1, CuET+TPI-1) and HCT116 (TPI-1, CuET+TPI-1, Dasatinib+TPI-1) lines. Notably, while CuET and TPI-1 generally enhanced cytotoxicity in MOLT-4 and HCT116 p53-/- cells, Dasatinib treatment resulted in decreased cytotoxicity in these specific lines. The findings underscore the complex, context-dependent dynamics of immune checkpoint modulation by targeted kinase and phosphatase inhibitors. The synergistic application of multidrug therapies, such as combinations involving Dasatinib, TPI-1, and PTP1Bi, demonstrates significant potential in fine-tuning T-cell receptor (TCR) signaling pathways. These combinations may offer a promising translational strategy to counteract T-cell exhaustion and enhance the efficacy of immunotherapeutic interventions. …více

Abstract:

T buněčné vyčerpání je stav charakterizovany zvyšenou expresí imunitních kontrolních bodů (immune checkpoints), jako je protein programované buněčné smrti 1 (PD-1) a jeho ligand PD-L1. T buněčné vyčerpání také vyrazně omezuje účinnost adaptivní imunitní odpovědi při chronické expozici určitému antigenu. Aby došlo k jeho překonání a obnově efektorovych funkcí T-lymfocytů, je nutná přesná farmakologická modulace nitrobuněčnych signálních drah, specificky cílících na molekuly, jako je Lck kináza a SHP-2 fosfatáza. Tato práce si kladla za cíl zhodnotit in vitro účinky různych cílenych farmakologickych inhibitorů a látek, konkrétně Dasatinibu (inhibitor Lck), inhibitorů tyrosinových fosfatas (TPI-1, PTP1Bi) a CuET, podávanych samostatně i v multilékovych kombinacích, na expresi PD-1 a PD-L1, jakož i na fosforylaci Lck v lidskych T-lymfocytech a jejich cytotoxickou funkci. Mononukleární buňky periferní krve (angl. PBMCs) byly izolovány z krve zdravých dárců pocházející z Transfúzního oddělení FN Olomouc, následně byly kultivovány a podrobeny buď farmakologické stimulaci (PMA/ionomycin), nebo stimulaci zprostředkované receptory (fytohemaglutinin, PHA). Modulace povrchové exprese PD-1 a PD-L1 byla kvantifikována pomocí průtokové cytometrie. Dále byla hodnocena cytotoxická aktivita ošetřených T-lymfocytů proti 2D kulturám nádorových buněk. Současně byl pomocí analýzy metodou Western blot hodnocen stav fosforylace Lck na specifických aminokyselinových zbytcích (Tyr394, Tyr192 a Tyr505). Analýza pomocí průtokové cytometrie odhalila, že intenzita buněčné odpovědi byla vysoce závislá na typu stimulace. Ve vzorcích stimulovaných PMA/ionomycinem vedlo ošetření Dasatinibem, TPI-1 a kombinací Dasatinib + TPI-1 + PTP1Bi ke statisticky významnému snížení exprese PD-L1, přičemž současně došlo ke zvyšení buněčné populace exprimující PD-1 i PD-L1. Ve vzorcích stimulovaných PHA ošetřených kombinací CuET + TPI-1 došlo k významnému zvyšení exprese PD-1. Analýza Western blot prokázala, že buněčná stimulace úspěšně indukovala expresi PD-1 spolu s fosforylací Lck. Z kvalitativního hlediska Dasatinib konzistentně potlačoval fosforylaci Lck napříč testovanými podmínkami. Testy cytotoxicity odhalily odlišné odpovědi specifické pro jednotlivé buněčné linie. U linií A549 a K562 nebyly zaznamenány žádné statisticky významné změny napříč ošetřeními. Cytotoxicita se však plošně zvýšila u linií Jurkat (Dasatinib+TPI-1, CuET, TPI-1, CuET+TPI-1) a HCT116 (TPI-1, CuET+TPI-1, Dasatinib+TPI-1). Stojí za povšimnutí, že zatímco CuET a TPI-1 obecně zvyšovaly cytotoxicitu u buněk MOLT-4 a HCT116 p53-/-, ošetření Dasatinibem vedlo u těchto specifických linií ke snížení cytotoxicity. Tato zjištění zdůrazňují komplexní, na mnoha faktorech závislou dynamiku modulace imunitních kontrolních bodů pomocí cílených inhibitorů kináz a fosfatáz. Synergická aplikace více lékovych terapií, jako jsou kombinace zahrnující CuET, Dasatinib, TPI-1 a PTP1Bi, má velký potenciál pro přesné ovlivnění signálních drah T-buněčného receptoru (TCR). Tyto kombinace mohou představovat slibnou translační strategii pro potlačení vyčerpání T-lymfocytů a zvyšení účinnosti imunoterapeutických intervencí. …více

Keywords

T-buněčné vyčerpání PD-1 PD-L1 Lck kináza SHP-2 inhibitory kináz a fosfatáz cytotoxicita T-buněk Dasatinib disulfiram imunoterapie

Jazyk práce: angličtina

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 21. 4. 2026

Obhajoba závěrečné práce

Obhajoba proběhla 18. 5. 2026
Vedoucí: prof. Juan Bautista De Sanctis, Ph.D.

Citační záznam

Citovat tuto práci

Citace dle ISO 690:

BESTA SMRČKOVÁ, Helena. \textit{Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes}. Online. Diplomová práce. Olomouc: Univerzita Palackého v Olomouci, Přírodovědecká fakulta. 2026. Dostupné z: https://theses.cz/id/vmdygd/.

@MastersThesis{BESTA SMRCKOVA2026thesis,
AUTHOR = "BESTA SMRČKOVÁ, Helena",
TITLE = "Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes [online]",
YEAR = "2026 [cit. 2026-09-27]",
TYPE = "Diplomová práce",
SCHOOL = "Univerzita Palackého v Olomouci, Přírodovědecká fakultaOlomouc",
NOTE = "SUPERVISOR: prof. Juan Bautista De Sanctis, Ph.D.",
URL = "https://theses.cz/id/vmdygd/",
}

@MastersThesis{BESTA SMRCKOVA2026thesis,
AUTHOR = {BESTA SMRČKOVÁ, Helena},
TITLE = {Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes},
YEAR = {2026},
TYPE = {Diplomová práce},
INSTITUTION = {Univerzita Palackého v Olomouci, Přírodovědecká fakulta},
LOCATION = {Olomouc},
SUPERVISOR = {prof. Juan Bautista De Sanctis, Ph.D.},
URL = {https://theses.cz/id/vmdygd/},
URL_DATE = {2026-09-27},
}

{{Citace kvalifikační práce
 | příjmení = BESTA SMRČKOVÁ
 | jméno = Helena
 | instituce = Univerzita Palackého v Olomouci, Přírodovědecká fakulta
 | titul = Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes
 | url = https://theses.cz/id/vmdygd/
 | typ práce = Diplomová práce
 | vedoucí = prof. Juan Bautista De Sanctis, Ph.D.
 | rok = 2026
 | počet stran =
 | strany =
 | citace = 2026-09-27
 | poznámka =
 | jazyk = 
}}

Jak správně citovat práci

BESTA SMRČKOVÁ, Helena. Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes. Olomouc, 2026. diplomová práce (Mgr.). UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI. Přírodovědecká fakulta

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Zveřejněno v Theses:

světu

Jak jinak získat přístup k textu

Instituce archivující a zpřístupňující práci: UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI, Přírodovědecká fakulta

Odkaz na soubor do lokálního úložiště instituce

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie

Práce na příbuzné téma

Studium protinádorové a antimetastatické aktivity nového komplexu platiny obsahujícího inhibitor proteinových kináz a STAT inhibitor
Lucie Urbaníková
Studium syntézy a biologické aktivity vybraných derivátů 2,6,9-trisubstituovaných purinů jako duálních inhibitorů cyklin-dependentních a FLT3 kináz
Nikola BRAUNOVÁ
Inhibitory a aktivátory proteinových kináz
Ondřej Hylse
Úloha inhibitorů cyklin dependentních kináz při indukci transkripčního stresu a jejich vliv na aktivaci nádorového supresoru p53 a jeho homologů
Jitka Holčáková
New biologically active compounds based on pyrazolo[1,5-a]pyrimidine and its isosteres
Michaela Hylsová
Příprava a základní charakterizace nádorové linie rezistentní na inhibitory CDK
Kateřina LÓNOVÁ
Vývoj/adaptace analytické metody pro stanovení inhibitorů kináz (tyrosinkináz, RAF-kináz, MEK-kináz)
Valeriia Polkovnichenko
Syntéza a biologické hodnocení indol-1,4-diazepinonů jako inhibitorů cyklin-dependentních kináz
Vít MORÁVEK

Všechny práce

Název

Vložil

Vloženo

Práva

Theses vmdygd vmdygd/2

21. 4. 2026

Složky

Soubory

thesis Diploma_thesis_Besta_Smrckova.pdf

MARKLOVÁ, E.

22. 4. 2026

Přidání souboru

Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
Další operace se soubory

Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
Pohled pro experty

Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
Vyhledávání souborů

Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
Rychlý přístup k souborům

Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.

Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes – Bc. Helena BESTA SMRČKOVÁ

Bc. Helena BESTA SMRČKOVÁ

Diplomová práce

Role of PD-1 and tyrosine phosphatase-1 (SHP-2) activity on Lck activity in human T-lymphocytes

Role of PD1 and tyrosine phosphatase 2 (SHP-2) activity on Lck activity in human T lymphocytes

Abstract:

Abstract:

Keywords

Obhajoba závěrečné práce

Citační záznam

Citace dle ISO 690:

Jak správně citovat práci

Plný text práce

Obsah online archivu závěrečné práce

Jak jinak získat přístup k textu

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Práce na příbuzné téma

Složky

Soubory

Přidání souboru

Další operace se soubory

Pohled pro experty

Vyhledávání souborů

Rychlý přístup k souborům