Optimalizace preanalytické úpravy vzorků pro analýzu \nl{}fosfopeptidů pomocí CZE

Bc. Michaela Konečná

Diplomová práce

Optimization of sample preparation for the analysis of phosphopeptides by CZE

Anotace:

Tato diplomová práce se zabývá optimalizací preanalytické úpravy vzorků pro analýzu fosfopeptidů pomocí kapilární zónové elektroforézy ve spojení s UV detekcí. Jako modelový fosfoprotein, na kterém byly testovány postupy úpravy vzorku, byl vybrán hovězím ?-kasein, který byl štěpen proteolytickým enzymem trypsinem. Fosfopeptidy, obsažené v naštěpeném vzorku, byly obohaceny na titanových částicích a defosforylovány imobilizovanou alkalickou fosfatázou. Všechny kroky úpravy modelového vzorku byly ověřovány pomocí MALDI LTQ Orbitrap hmotnostní spektrometrie.

Abstract:

This diploma thesis was focused on optimization of sample preparation for the analysis of phosphopeptides using capillary zone electrophoresis in connection with UV detection. All sample preparation steps were tested on bovine ?-casein, which was chosen as a standard phosphoprotein. Sample of ?-casein was digested by the proteolytic enzyme trypsin. Phosphopeptides occurring in the peptide sample were enriched using titanium particles and dephosphorylated by immobilized alkaline phosphatase. All adjustment steps of model sample were verified by MALDI LTQ Orbitrap mass spectrometry.

Klíčová slova

kapilární zónová elektroforéza, MALDI-MS, fosfopeptidy, ?-kasein, alkalická fosfatáza, trypsin

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 23. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2013
• Vedoucí: Ing. Václav Staněk, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Analytická chemie