Úvodní strukturní a funkční analýza proteinu LONRF3

Bc. Veronika MARTINKOVÁ

Master's thesis

Introduction to structural and functional analysis of LONRF3 protein

Abstract:

Proteiny tepelného šoku Hsp70/Hsp90 (Heat-shock protein 70/90) jsou nepostradatelnou součástí buněčných systémů podílejících se na udržení proteinové homeostáze. Fyziologická funkce Hsp70/90 je podmíněna existencí proteinových komplexů těchto chaperonů s tzv. ko chaperony. Jedním z motivů podílejících se na těchto protein-proteinových interakcích je tzv. TPR (tetratricopeptide repeat) doména. Tato práce se zabývá charakterizací potenciálního TPR ko-chaperonu proteinu LONRF3. V teoretickém úvodu je popsána role molekulárních chaperonů a ko-chaperonů v systémech udržujících buněčnou proteinovou homeostázi a také dosavadní poznatky o proteinech LONRF. V experimentální části práce byla zkoumána struktura a funkce proteinu LONRF3 pomocí biochemických a molekulárně biologických metod včetně limitované proteolýzy, interakčních studií a qRT-PCR. Výsledky ukázaly, že je protein LONRF3 asociován s chaperony Hsp70 a Hsp90, byla zjištěna jeho subcelulární lokalizace a také jsme prokázali zvýšenou expresi genu LONRF3 v buňkách linie MCF-7 ovlivněných inhibitorem proteazomu (bortezomib).

Abstract:

Heat-shock proteins 70/90 are essential components of cellular systems involved in maintaining of protein homeostasis. The physiological function of Hsp70/90 is influenced by protein complexes of these chaperones with their co chaperones. Protein-protein interactions are controled by structural motifs, one of them is TPR (tetratricopeptide) domain. This thesis is focused on the characterization of the putative TPR co chaperone LONRF3 protein. The role of molecular chaperones and co-chaperones in maintenance of protein homeostasis is described in the theoretical part. In the experimental part we evaluated the structure and function of LONRF3 using biochemical and molecular methods including limited proteolysis, interaction studies and qRT-PCR. Our results uncovered LONRF3 protein association with Hsp70/90 chaperones, its subcellular localisation and an increase of LONRF3 gene exression in MCF-7 cells with inhibited proteasomal function.

Keywords

Chaperon, ko-chaperon, Hsp70, Hsp90, LONRF3, TPR doména, SBP pull-down, qRT-PCR, HDX

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 5. 2016

Accessible from:: 9. 5. 2016

Thesis defence

• Supervisor: MUDr. Petr Müller, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Experimental Biology