Imobilizace cholinesterasy na povrch mikrotitračních destiček

Bc. Martina Fejfarová

Diplomová práce

Cholinesterase immoblization on microplate surface

Anotace:

Acetylcholinesterasa (AChE) je enzym, který se podílí na urychlení rozpadu acetylcholinu na synapsi. Bez přítomnosti AChE by tento rozpad trval neúměrně dlouho a vedení vzruchů by nebylo možné. Právě toto způsobují organofosfátové a karbamátové pesticidy a bojové látky. V diplomové práci jsme tyto látky prokazovali Ellmanovou metodou, což je metoda relativně spolehlivá, rychlá, reprodukovatelná a levná. Pro zavedení do praxe jsme používali 96 jamkové mikrotitrační destičky s imobilizovanou AChE. Toto uspořádání umožňuje rychlé stanovení velkého množství vzorků v jeden okamžik a tím značnou úsporu času při stanovování inhibitorů AChE. Jako alternativní chromogenní substrát jsme používali indoxylacetát.

Abstract:

Acetylcholinesterase is enzyme which accelerates decomposition of acetylcholine on synapse. Decomposition without acetylcholinesterase would be too slow and conduction wouldn´t be possible. Carbamate and organophosphate pesticides and warefare agents cause irreversible inhibition of the enzyme. I used Ellman´s method in this thesis. It is a reliable, fast and cheap protocol. I used 96 wells mikroplate with immobilized acetylcholinesterase. I wanted to prepare a method for routine assay. In this way, it is possible to set many samples in one moment. It is better and faster than performance of a standard spectrophotometer. Indoxylacetate was used as an alternative chromogenic substráte for the enzyme.

Klíčová slova

acetylcholinesterasy, imobilizace, organofosfáty, karbamáty, Ellmanova metoda, indoxylacetát

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 10. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 5. 6. 2013
• Vedoucí: doc. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů