Proteomické přístupy v onkologickém výzkumu: separační metody, SELDI-TOF MS a imunoanalýzy při studiu nádorové angiogeneze

Bc. Kateřina Pilátová, Ph.D.

Diplomová práce

Proteomic approaches in oncology: separation methods, SELDI-TOF MS and imunoanalysis in the tumor angiogenesis research

Anotace:

Proces tvorby nových krevních cév, angiogeneze, je nezbytná podmínka pro růst nádoru za účelem jeho zásobení kyslíkem a živinami, což vedlo k vývoji antiangiogenní terapie. Stále však chybí vhodný prediktivní faktor pro stanovení účinnosti protinádorové terapie založené na inhibici angiogeneze u konkrétního pacienta. Trombocyty jsou významnými zdroji regulátorů angiogeneze. V této práci byla provedena proteomická SELDI-TOF MS analýza lyzátů trombocytů 31 pacientů s aktivním onkologickým onemocněním, 28 osob, které neměly v době měření aktivní onkologické onemocnění, a 54 zdravých kontrol s cílem srovnat rozdíly v proteinové expresi. Podařilo se identifikovat inhibitor angiogeneze PF-4, jeho exprese však byla v rámci těchto tří skupin shodná stejně jako ostatních detekovaných proteinů. Dále byla provedena komparativní analýza koncentrací adhezních molekul sVCAM-1, sPECAM-1, sE-selektinu, sP-selektinu, sICAM-1 a sICAM-3 v plazmě 22 pacientů s onkologickým onemocněním a 22 zdravých kontrol. Tyto adhezní molekuly se podílí na více procesech spojených s růstem nádoru včetně angiogeneze. Významně vyšší hladina byla pozorována pouze u sVCAM-1. Tato molekula se zdá být univerzální známkou přítomnosti nádoru.

Abstract:

Tumor growth requires the new blood formation, angiogenesis, for supply of oxygen and nutritients. This fact have led to development of antiangiogenic therapy but no biomarker has yet been found that predicts the efficacy of any angiogenesis inhibition-based cancer therapy for particular patient. Platelets are significant source of angiogenesis regulators. In this study, we performed proteomic SELDI-TOF MS analysis of trombocytes from 31 patients with active oncology disease, 28 individuals in remission and 54 healthy controls to compare differences in protein expression. We indentified angiogenesis inhibitor PF-4. Expression levels of PF-4 along with other detected proteins did not differ in this tree groups. Immunoassay determination and comparision of plasma sVCAM-1, sPECAM-1, sE-selectin, sP-selectin, sICAM-1 and sICAM-3 levels was performed in 22 cancer patients and 22 healthy controls. These molecules are involved in several processes associated with cancer progression including angiogenesis. Plasma level of VCAM-1 was significantly higher in cancer patients than healthy controls. This molecule appears to be universal marker for cancer presence.

Klíčová slova

proteomické přístupy, hmotnostní spektrometrie, imunoanalýza, průtoková cytometrie, SELDI-TOF MS, rakovina, nádorová angiogeneze, trombocyty, destičkový faktor 4, adhezní molekuly, sVCAM-1, sPECAM-1, sE-selektin, sP-selektin, sICAM-1, sICAM-3, proteomic approaches, mass spectometry, immunoanalysis, flow cytometry, cancer, tumor angiogenesis, platelets, platelet factor 4, adhesion molecules, sE-selectin, sP-selectin

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 4. 2010

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 7. 6. 2010
• Vedoucí: doc. RNDr. Lenka Zdražilová Dubská, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie