Separace laktátdehydrogenas afinitní chromatografií

Bc. Nikola Novotná

Diplomová práce

Separation of Lactate Dehydrogenases by Affinity Chromatography

Anotace:

Práce se zabývá chromatografickou separací laktáthydrogenas z kvasinek Saccharomyces cerevisiae s použitím různých nosičů: Matrex Gel Blue A, Sepharosa-cytochrom c, AH-Sepharosa-kyselina α-kyano-4-hydroxyskořicová a zcela nově CH-Sepharosa-izoserin. Matrex Gel Blue A byl získán komerčně, Sepharosa-cytochrom c byla získána dříve, poslední dva byly vytvořeny v rámci této práce. Popisuje způsob kultivace, desintegrace, frakcionace, stanovení koncentrace bílkovin a enzymových aktivit. Popisuje take použití nativní elektroforézy. Jako nejúčinnější chromatografický materiál se ukázal Matrex Gel Blue A. Nově připravený nosič CH-Sepharosa-izoserin se neosvědčil.

Abstract:

This thesis deals with chromatographic separation of lactate dehydrogenases from yeast Saccharomyces cerevisce using various matrices: Matrex blue A, Sepharose-cytochrom c, AH Sepharose-α-cyano-4-hydroxycinnamic acid and quite new CH-Sepharose-izoserin. Matrex blue A is a commercial product and was purchased, Sepharose-cytochrom c was prepared earlier and the last two were prepared for the purposes of this work. The text describes the method of cultivation, disintegration, fractionation, it also shows how protein concentration and enzyme activities, were determined. It describes the use of native electrophoresis too. The best results were achieved with Matrex Gel Blue A. Newly prepared matrix CH-Sepharose-izoserin gave poor results.

Klíčová slova

laktátdehydrogenasy, afinitní chromatografie, Saccharomyces cerevisiae, Matrex Gel Blue A, AH-Sepharosa 4B–α–kyano–4–hydroxycinamát, CH-Sepharosa 4B–izoserin, Sepharosa–cytochrom c

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 28. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2013
• Vedoucí: doc. RNDr. Petr Zbořil, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie