Plíseň slunečnicová: problematika monosporických izolátů

Bc. Nikol KRČOVÁ

Master's thesis

Sunflower downy mildew: single spore isolates

Abstract:

Diplomová práce se zabývá problematikou monosporických izolátů, se zaměřením na izolaci monozoosporických klonů Plasmopara halstedii původem z Helianthus annuus. Součástí teoretické části je charakteristika biotrofní parazitické řasovky P. halstedii, která je původcem plísně slunečnicové, včetně biologie, kultivace a izolace tohoto patogenu. Shrnuty jsou metody používané při monosporické a monosporangiální izolaci různých druhů mikroorganismů. Cílem experimentální části bylo připravit vlastní monozoosporické izoláty ze tří vybraných pravděpodobně směsných vzorků P. halstedii. K odchytu životaschopných zoospor uvolněných z čerstvých zoosporangií kultivovaných na 1 % agaru ve tmě při teplotě 19 °C byla použita kapilární technika. Jednotlivé zoospory byly odchytávány již po 45 min kultivace pomocí skleněné kapiláry připojené k mikromanipulátoru. Kultivace probíhala na listových discích pocházejících z děložních listů náchylného genotypu slunečnice Helianthus annuus cv. Peredovik a cv. Giganteus v jamkách kultivačních destiček s 1 ml destilované vody při fotoperiodě 12/12 h a teplotě 19 °C. Touto metodou bylo vytvořeno celkem 5 monosporických izolátů. Pro další studium toho patogena je důležité pracovat s geneticky homogenním materiálem, proto je vhodné použít právě monosporické izoláty. Bohužel úspěšnost metody je velmi malá, pouze 1-2 %.

Abstract:

Master thesis deals with the issue of monosporic isolates, in details with the isolation of monozoosporic clones of Plasmopara halstedii originating from Helianthus annuus. The theoretical part embodies characteristics of biotrophic parasitic oomycete P. halstedii, the causative agent of sunflower downy mildew, including biology, cultivation and isolation of this pathogen. There is a summary of the methods used in the monosporic and monosporangial isolation of the different types of microorganisms. The aim of the experimental part was to prepare monozoosporic isolates from three likely mixed samples of P. halstedii. To obtain monozoosporic isolates, fresh zoosporangia were cultivated on 1% agar in darkness, at 19 °C and the capillary technique used to isolate released viable zoospores. Individual zoospores were captured after 45 minutes of cultivation by a glass capillary connected to a micromanipulator under light microscope. The cultivation of individual isolates took place on cotyledon discs of susceptible sunflower Helianthus annuus cv. Peredovik and cv. Giganteus. This took place in microplates with 1 ml of distilled water and a photo-period of 12/12 hours at a temperature of 19° C. Using this method, five monosporic isolates in total were created. For further study of this pathogen, it is important to work with genetically homogeneous material and therefore it is appropriate to use monozoosporic isolates. Unfortunately, the yield of this method is only 1-2%.

Keywords

Plasmopara halstedii, Helianthus annuus, inolulace, kapilární technika, zoospora, listový disk, izolát

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 11. 8. 2020

Thesis defence

• Supervisor: doc. RNDr. Michaela Sedlářová, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Chemistry / Teaching Training in Chemistry for Secondary Schools - Teaching Training in Biology for Secondary Schools