Stanovení některých vybraných antimykotik metodou kapalinové chromatografie

Martina FRIEDLOVÁ

Bachelor's thesis

Determination of some antimycotic drugs by HPLC method

Abstract:

Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout a otestovat takou metodu HPLC, aby bylo možno stanovit antimykotika flukonazol a ketokonazol. Tuto metodu poté validovat a optimalizovat. V případě optimálních výsledků metodu zavést do běžné laboratorní praxe. Byla vyvinuta, validována a optimalizována metoda HPLC s mobilní fází voda : acetonitril v poměru 350 : 150, modifikátor: 50 ?l trimethylaminu, pH = 3,46 (upraveno kyselinou fosforečnou). Na extrakci vzorků séra bylo použito prostředí 1 mol/l dihydrogenfosforečnanu sodného a dietyléter. HPLC analýza se prováděla na koloně Grace Smart RP18, 150 x 2,1 mm, velikost částic 5?m při vlnové délce 260 nm. Mobilní fáze měla rychlost 220 ?l/min a doba analýzy byla 15 minut. Výtěžnost byla 96-107,4% a variační koeficient 2,4-9,8% pro jednotlivé látky. Metoda byla otestována proměřením pacientským vzorků v celém rozsahu kalibrace. Metoda splňuje požadavky validačního protokolu a bude zavedena na ÚKF. Metoda se na ÚKF bude používat pro TDM stávajících antimykotik a v budoucnosti bude rozšířena o další analyty např. vorikonazol a itrakonazol, které se podávají v případě život ohrožujících systémových mykóz.

Abstract:

The aim of this bachelor´ s thesis was to develop and ensure the HPLC method presented so as to provide an antifungal fluconazole and ketoconazole. HPLC method has been tested, validated and optimized with mobile phase water: acetonitrile in the ratio 350: 150, modifier: 50 ml trimethylamine, pH 3.46 (adjusted with phosphoric acid). For extraction of serum samples 1 mol / l sodium dihydrogen phosphate and diethylether were used. HPLC analysis was performed on Grace Smart RP18 column, 150 x 2,1 mm, 5 ?m and measured at 260 nm. Time of analysis was 15 minutes. Recovery was 96,0?107,4 % and coefficient of variations between 2,4?9.8%. Patients´ samples of fluconazole and ketoconazole were measured in the whole range of calibration. Method meets the requirements of the validation protocol and will be introduced to the UKF for TDM of antifungal drugs. In the future analysis should be extended to other analytes such as voriconazole and itraconazole, which can be used in the treatment of life-threatening systemic fungal infections.

Keywords

Vysoko účinná kapalinová chromatografie, Antimykotika, Flukonazol, Ketokonazol

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 20. 4. 2011

Accessible from:: 20. 4. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 3. 6. 2011
• Supervisor: RNDr. Hana Brozmanová, CSc.

University of Ostrava

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Chemistry