Klonování a exprese lidského genu HSD17B1

Ilona Homolková

Bachelor's thesis

Cloning and expression of the human HSD17B1 gene

Anotácia:

Enzym 17β-hydroxysteroiddehydrogenasa typu 1 katalyzuje NAD(P)(H) dependentní oxidoredukci oxo/β-hydroxylové skupiny v poloze 17 uhlíku androgenních a estrogenních hormonů a patří do nadrodiny dehydrogenas s krátkým řetězcem Tato reverzibilní reakce je důležitým kontrolním mechanismem pro ligandy nukleárních receptorů, konverze "přepíná" mezi 17β-OH receptorovými ligandy a jejich inaktivními 17-oxo-metabolity. Expozice estrogenu ve tkáních ovlivňuje riziko rakoviny prsu a endometria. Gen HSD17B1 produkuje enzym, který katalyzuje konverzi estronu na estradiol. Estradiol je ženský pohlavní steroidní hormon a jako jediný je zodpovědný za účinky estrogenů. U žen v menopauze je hlavním zdrojem estrogenů periferní tkáň, kde dochází k jejich biosyntéze. Enzym 17β- hydroxysteroiddehydrogenasy typu 1 byl připraven pomocí metod molekulární biologie v rekombinantní formě. DNA nesoucí sekvenci genu hsd17b1 byla amplifikována metodou polymerázové řetězové reakce (PCR) a byla vložena do sekvenačního vektoru pCR4TOPO pomocí TA TOPO klonování. Cílová sekvence genu byla subklonována do expresního vektoru pET28b a vzniklé klony byly analyzovány pomocí PCR a restrikční analýzy. Pro přípravu rekombinantního proteinu genu HSD17B1 byl použit expresní kmen bakterií Escherichia coli BL21 (DE3). Pro indukci exprese genu rekombinantního proteinu 17β-HSD1 v bakteriálních buňkách byl použit isomer alolaktosy isopropyl-β-D-1-thiogalaktopyranosid.

Kľúčové slová

hydroxysteroid dehydrogenasy, estrogen, nikotinadenindinukleotid, nikotinadenindinukleotidfosfát, estradiol

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 5. 6. 2018
• Vedúci: Mgr. Monika Schmidt, Ph.D.
• Oponent: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D.

University of Hradec Králové

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Chemie / Chemie