Nanočásticové sondy pro zobrazovací hmotnostní spektrometrii 3D buněčných agregátů

Bc. Adéla Tomaniecová

Master's thesis

Nanoparticle probes for mass spectrometry imaging of 3D cell aggregates

Abstract:

Tato diplomová práce se zabývá srovnáním dvou postupů imunohistochemického značení proteinu Ki-67 zlatými nanočásticemi. První z postupů je již zavedený a optimalizovaný protokol, který využívá interakci mezi biotinylovanou protilátkou anti Ki-67 a nanočásticemi konjugovanými se streptavidinem. Druhý z nich je vyvíjen v rámci této diplomové práce a využívá reakce N-hydroxysukcinimid esteru s aminoskupinou protilátky. Značení proteinu probíhá na řezech sféroidu, což je buněčný model kulovitého tvaru, který simuluje prostředí karcinomu, v této práci kolorektálního. Pro zobrazení řezu sféroidu s navázanými nanočásticemi se využívá hmotnostní spektrometrie s ionizací indukčně vázaným plazmatem v režimu detekce jednotlivých částic. Jako referenční metoda byla použita laserová skenovací konfokální mikroskopie s využitím fluorescenčního barviva.

Abstract:

The diploma thesis deals with the comparison of two methods of immunohistochemical labeling of Ki-67 protein with gold nanoparticles. The first of the protocols is an established and optimized method that uses the interaction between biotinylated anti Ki-67 antibody and streptavidine conjugated nanoparticles. The second of those protocols is developed as part of this thesis and uses the reaction between N-hydroxysuccinimide ester with the amino group of the antibody. Protein labeling is performed on sections of a spheroid, a spherical cell model that simulates the environment of a colorectal carcinoma in this work. Mass spectrometry with inductively coupled plasma ionization in single particle detection mode is used to display a section of a spheroid with conjugated nanoparticles. Laser scanning confocal microscopy using fluorescent dye was used as a reference method.

Keywords

sféroid, imunohistochemie, nanočástice, protein Ki-67, N-hydroxysukcinimid ester, hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem, laserová ablace, laserová skenovací konfokální mikroskopie, spheroid, immunohistochemistry, nanoparticles, N-hydroxysuccinimide ester, inductively coupled plasma mass spectrometry, laser scanning confocal microscopy

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 18. 5. 2023

Thesis defence

• Date of defence: 16. 6. 2023
• Supervisor: prof. Mgr. Jan Preisler, Ph.D.
• Reader: Mgr. Marta Pelcová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry