Stanovení malondialdehydu jako sekundárního produktu lipidové peroxidace v lidských nádorových buňkách

Martina ZEHNÁLKOVÁ

Bachelor's thesis

Determination of malondialdehyde as the secondary product of lipid peroxidation in human cancer cells

Abstract:

Reaktivní formy kyslíku jsou intenzivně studovanými látkami, jelikož mohou vyvolávat oxidační stres a poškození biomolekul, např. lipidovou peroxidaci. V této studii byl sledován vliv tří reaktivních forem kyslíku, konkrétně singletního kyslíku, peroxidu vodíku a hydroxylového radikálu na lidské rakovinné buňky. Byl vyhodnocen jejich vliv na vitalitu buněk a pomocí fluorescenční próby byla konfokálním mikroskopem potvrzena probíhající lipidová peroxidace. Metodou HPLC byla stanovena koncentrace vznikajícího malondialdehydu, sekundárního produktu lipidové peroxidace. Výsledky ukazují významný vliv reaktivních forem kyslíku na vitalitu buněk, kdy s delším inkubačním časem se vitalita buněk snižovala. Dále byl demonstrován vznik hydroperoxidů u rakovinných buněk ošetřených reagenty tvořícími singletní kyslík a hydroxylový radikál. Z výsledků stanovení malondialdehydu vyplývá, že vybrané reaktivní formy kyslíku nevykazují rostoucí tvorbu malondialdehydu s delším inkubačním časem. Nelze však vyloučit tvorbu konkurenčních sekundárních produktů lipidové peroxidace odlišnými dráhami.

Abstract:

Reactive oxygen species are intensively studied substances, because they can cause oxidative stress and damage to biomolecules, such as lipid peroxidation. In this study, the effect of three reactive oxygen species, namely singlet oxygen, hydrogen peroxide and hydroxyl radical, on human cancer cells was observed. Its effect on cell viability was evaluated and lipid peroxidation via fluorescence probe and confocal microscopy was confirmed. The concentration of malondialdehyde, the secondary lipid peroxidation product, was determined by HPLC. The results showed a significant effect of reactive oxygen species on cell viability, when with longer incubation time the cell viability decreased. Furthermore, the formation of hydroperoxides in singlet oxygen and hydroxyl radical treated cancer cells was demonstrated. The results of malondialdehyde determination indicate that selected reactive oxygen species do not show increased malondialdehyde production with longer incubation time. However, the formation of competing secondary products by different paths of lipid peroxidation can not be excluded.

Keywords

Lipidová peroxidace, malondialdehyd, HPLC

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 5. 2018

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Ursula Ferretti

PALACKÝ UNIVERSITY OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biotechnology and Gene Engineering