Kvalitativní parametry kryokonzervovaného hřebčího ejakulátu s přídavkem specifické proteinové frakce semenné plazmy

Bc. Veronika Ištvaníková

Master's thesis

Qualitative parameters of cryopreserved stallion ejaculate with addition of specific protein fraction from seminal plasma

Abstract:

Cílem diplomové práce je ověřit hypotézu, že přídavek heparin vázající proteinové frakce semenné plazmy k ejakulátu před zamrazením, zvýší kvalitu rozmrazeného ejakulátu. Ejakulát byl odebrán standardním způsobem od šesti hřebců. Spermie byly naředěny kryokonzervačním ředidlem. Jednotlivé proteinové frakce byly přidávány k naředěným spermiím ve třech koncentracích 150, 250 a 500 μg/ml. Takto připravené semeno se dále manuálně plnilo do plastových pejet o objemu 0,5 ml, ve kterých bylo zmrazeno a dále uchováváno v tekutém dusíku. Po rozmrazení (37°C, 30 s.) byla kvalita kryokonzervovaného ejakulátu hodnocena na úrovni funkčnosti plasmatické membrány (HOS test), integrity plasmatické membrány (testování viability) a integrity akrosomu. Přídavek heparin-nevázající a heparin-vázající proteinové frakce semenné plazmy do ejakulátu hřebců před zmrazením neměl vliv na vyšší zastoupení spermií s funkční plasmatickou membránou, spermií s neporušenou integritou plasmatické membrány a obsah mrtvých spermií s poškozenou integritou akrosomu po rozmrazení. Zaznamenali jsme signifikantní zvýšení obsahu živých spermií s neporušenou integritou akrosomu po rozmrazení v inseminačních dávkách s přídavkem heparin-vázající proteinové frakce semenné plazmy před zmrazením.Na kvalitu rozmrazených spermií neměl signifikantní vliv přídavek heparin-nevázající a heparin-vázající proteinové frakce v námi vybraných koncentracích.Na jednotlivé hřebce neměl přídavek heparin-nevázající a heparin-vázající proteinové frakce signifikantní vliv na kvalitu rozmrazených spermií. Individualita hřebce při přídavku heparin-nevázající a heparin-vázající proteinové frakce měla signifikantní vliv na funkčnost a integritu plasmatické membrány, ovšem neměla signifikantní vliv na integritu akrosomu rozmrazených spermií.Na základě výsledků této práce můžeme obecně konstatovat, že přídavek heparin-vázající proteinové frakce neměl zásadní příznivý, ale ani škodlivý, vliv na spermie po rozmrazení. Navíc můžeme říci, že přídavek heparin-nevázající proteinové frakce měl téměř shodný vliv na kvalitu rozmrazených spermií.

Abstract:

The goal of this thesis is to verify the hypothesis that the addition of heparin binding protein fraction of seminal plasma to ejaculate before freezing will increase the quality of thawed ejaculate.Ejaculate was collected in a standard way from six stallions. The spermatozoa were diluted with cryopreservative diluent. The individual protein fractions were added to the diluted spermatozoa in three concentrations of 150, 250 and 500 µg/ml. The seed prepared this way was further manually filled into 0.5 ml plastic straws, where in which it was frozen and kept in liquid nitrogen. After thawing (37°C, 30 sec.),was quality of cryopreserved ejaculate quality was assessed at plasma membrane functionality (HOS test), plasma membrane integrity (viability testing) and acrosome integrity.Addition of non-heparin binding and heparin binding protein fraction of seminal plasma the pre-freezing stallion ejaculate did not affect the higher plasma functional sperm count, sperm with intact plasma membrane integrity, and the content of dead sperm with damaged acrosome integrity after thawing. We noted a significant increase in live sperm content with intact acrosome integrity after thawing in insemination doses with addition of heparin binding protein fraction of seminal plasma before freezing.The quality of thawed spermatozoa was not significantly affected by the addition of non-heparin binding and heparin binding protein fractions at our selected concentrations.The addition of non-heparin binding and heparin binding protein fractions did not significantly affect the quality of thawed sperm on individual stallions. The individuality of the stallion with the addition of non-heparin binding and heparin binding protein fraction had a significant effect on the functionality of and plasma membrane integrity, but did not significantly affect the integrity of the acrosome thawed sperm.Based on the results of this work, we can generally conclude that the addition of heparin binding protein fraction was not essential, but also not harmful, the effect on sperm.after thawing. In addition, the addition of non-heparin binding protein fraction has almost the same effect on the quality of thawed sperm.

Keywords

HEP+, Hřebec, Hypoosmotický test, Kryokonzervace, Spermie, Viabilita

Keywords

HEP+, Stallion, Hypoosmotic sweling test, Cryopreservation, Sperm, Viability

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 12. 4. 2019

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Biotechnology / Reproduction Biotechnology