Příprava monoklonálních protilátek proti antigenům borelie

Veronika ŠVEJDOVÁ

Bachelor's thesis

Preparation of monoclonal antibodies against Borrelia

Abstract:

Ve své bakalářské práci se zaměřuji na přípravu monoklonálních protilátek proti antigenům borelie. V teoretické části bakalářské práce popisuji druhy rodu Borrelia a protilátky. V úvodu práce je pojednáno o historii objevu spirochéty způsobující onemocnění lymeská borelióza, dále o vektorech tohoto onemocnění a rozdělení borelií podle geografického výskytu. Následuje taxonomické zařazení a popis bakterie, který je zaměřený na bičíky, uspořádání genetického materiálu a na vnější povrchové antigeny důležité pro tyto bakterie. V další části popisuji vztah borelie, vektora a hostitele a průběh imunitní odpovědi při onemocnění. Podrobněji jsou popsány kožní příznaky onemocnění lymeská borelióza a pár slov o relabující horečce. Tato kapitola je zakončena popsáním laboratorní diagnostiky původce lymeské boreliózy Borrelia burgdorferi. Dále se zaměřuji na vznik protilátek přirozenou cestou a na přípravu monoklonálních protilátek hybridomovou technologií. Stručně popisuji jejich rozdělení a využití. Praktická část bakalářské práce byla uskutečněna v laboratořích Přírodovědecké fakulty Jihočeské univerzity. Zde jsem pomocí hybridomové technologie fúzí spojila myelomovou buňku se splenocytem imunizované myši za vzniku hybridomu. Tyto hybridomy jsem následně klonovala a kultivovala v mediu, které jsem testovala metodou ELISA na výskyt protilátek. Hybridomy s vysokou produktivitou byly zálohovány zmrazením v tekutém dusíku. Monoklonální protilátky jsem přečistila, zkoncentrovala a otestovala jejich titr.

Abstract:

In my bachelor thesis I deal with preparation of monoclonal antibodies against antigens of Borrelia. In theoretical section I describe genus Borrelia and antibodies. The introduction deals with the history of discovery of the spirochete that causes Lyme disease, vectors of this disease and classification of Borreliae according to geographical occurrence. Taxonomic categorization and description of the bacterium followers. It is focused on flagellum, arrangement of genetic material and on external surface antigens important for this bacterium. In the next section I describe Borrelia vector - host interactions and the development of immune response during the disease. Dermal symptoms of the Lyme disease are described in detail. A few words about relaxing fever are added. This chapter ends with description of laboratory diagnostics of Borrelia burgdorferi. Next, I focused on the characterization of antibodies and on preparation of monoclonal antibodies by hybridoma technology. I briefly describe ways of their utilization. Practical part of Bachelor thesis was carried out in the laboratories of Faculty of Science. Here, with the help of hybridoma technology, I fused myeloma cells with splenocytes of immunized mice producing hybridomas. These hybridomas I cultivated in medium, which I subsequently tested for occurrence of antibodies by ELISA. Hybridomas having high productivity were cloned, frozen and stored in liquid nitrogen. Finally I purified monoclonal antibodies, concentrated them and tested their titre.

Keywords

Borrelia burgdorferisensu lato, lymeská nemoc, monoklonální protilátky, hybridomová technologie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 5. 5. 2015

Accessible from:: 5. 5. 2015

Thesis defence

• Supervisor: prof. RNDr. Jan Kopecký, CSc.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician