Studium mechanismů buněčné smrti po účinku vybraných přírodních látek a cytostatik

Bc. Michaela Piscová

Diplomová práce

Study of the cell death mechanisms upon the treatment of selected natural products and cytostatics

Anotace:

Předkládaná práce se zabývá studiem mechanismů buněčné smrti po působení látek s různým mechanismem účinku u buněčných linií A375, HT29 a Jurkat. Byl studován účinek rostlinných alkaloidů sanguilutinu a chelerytrinu, inhibitorů topoizomeráz camptothecinu, etoposidu a doxorubicinu, látek ovlivňujících mikrotubuly taxolu a vinblastinu, inhibitoru cyklin-dependentních kináz dinaciclibu, inhibitoru inhibitorů apoptotických proteinů LCL161 a TNF-α. Ke studiu byly využity inhibitory klíčových regulátorů buněčných smrtí a buněčné linie s vyřazenými geny pro tyto regulátory. Bylo zjištěno, že sanguilutin vyvolává pravděpodobně nekroptózu, při které se u buněčné linie HT29 uplatňují proteiny RIP1 a RIP3 a u linie A375 především protein RIP3. Dále jsme zjistili, že buňky linie HT29 jsou k působení látek i inhibitorů méně citlivé než buňky linie A375. U buněčné linie Jurkat pak odumírají buňky po působení všech testovaných látek programovanou buněčnou smrtí závislou na kaspázách a proteinu FADD. Pouze kombinace TNF-α a inhibitoru IAPs LCL161 vyvolala buněčnou smrt, nekroptózu u buněčné linie s vyřazenými efektorovými kaspázami (Jurkat Casp3/6/7).

Abstract:

The present thesis deals with study of the cell death mechanisms upon treatment of compounds with different mechanism of action in cell lines A375, HT29 and Jurkat. The effect of plant alcaloids sanguilutine and chelerythrine, topoisomerase inhibitors camptothecin, etoposide and doxorubicin, compounds causing changes in the properties of the microtubules taxol and vinblastine, inhibitor of cyclin-dependent kinases dinaciclib, inhibitor of cIAP proteins LCL161 and TNF-α was studied. Inhibitors of key cell death regulators and cell lines with knockouted genes for these regulators were used. It was found that sanguilutine induces necroptosis in which proteins RIP1 and RIP3 are involved in cell line HT29 and mainly RIP3 protein in cell line A375. Furthermore, we found that HT29 cells are less sensitive to both compounds and inhibitors than A375 cells. Jurkat cells die by programmed caspase and FADD dependent cell death upon exposure to all tested compounds. Only combination of TNF-α and the IAPs inhibitor LCL161 induced necroptosis in cell line with knocked-down effector caspases (Jurkat Casp3/6/7).

Klíčová slova

programovaná buněčná smrt, apoptóza, nekroptóza, kaspázy, MLKL, RIP1, RIP3, FADD, programmed cell death, apoptosis, necroptosis, caspases

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 8. 6. 2017
• Vedoucí: doc. MUDr. Iva Slaninová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie / Molekulární biologie a genetika