Využití metody RFLP PCR, PCR ARMS a reverzní hybridizace pro detekci nejčastějších trombofilních mutací v české populaci

Markéta MATĚJKOVÁ

Bachelor's thesis

Application of the method RFLP PCR , PCR ARMS and reverse hybridization for detecting the most common thrombophilic mutations in the Czech population

Abstract:

Pojem trombofilie začíná být v dnešní době velice aktuálním tématem. Jedná se o zvýšenou predispozici k tvorbě trombů a následné komplikace právě v důsledku zvýšeného srážení krve, které mohou být velmi vážné až smrtelné. Včasné stanovení trombofilních mutací pomůže pacientovi předejít mnoha rizikovým situacím (např. v případě operace, těhotenství). V dnešní době existuje nejméně 30 genetických laboratoří v České republice, které trombofilní mutace vyšetřují. Bohužel toto vyšetření je hrazeno pojišťovnou pouze u indikovaných případů podléhajícím přísným selekčním kritériím. Pokud má jedinec zájem o takové vyšetření a není indikován ošetřujícím lékařem, musí vyšetření hradit sám. Několik pojišťoven v rámci svých preventivních programů na tato vyšetření přispívají určitou finanční částkou, jedná se např. o Českou průmyslovou zdravotní pojišťovnu, Zdravotní pojišťovnu ministerstva vnitra ČR či Zdravotní pojišťovnu Revírní bratrskou pokladnu. Cílem mé bakalářské práce bylo praktické zvládnutí metody RFLP PCR, metody PCR ARMS a reverzní hybridizace na stripech pro detekci nejčastějších trombofilních mutací v české populaci a vypracování rešerše týkající se dané problematiky. V teoretické části své bakalářské práce se zaměřuji na popis jednotlivých nejvýznamnějších trombofilních mutací v české populaci a jejich rizika. Dále zde uvádím jednotlivé genetické metody, kterými se vybrané trombofilní mutace v genetických laboratořích vyšetřují. V praktické části uvádím vlastní výsledky, získané vyšetřením čtyř hlavních trombofilních mutací a polymorfismů. Jedná se o Leidenskou mutaci, mutaci protrombinového genu a polymorfismy MTHFR 1298 a MTHFR 677. Vyšetření jsem prováděla pomocí genetických metod RFLP-PCR, PCR ARMS a reverzní hybridizace na stripech. Veškeré metody jsem prováděla v genetické laboratoři GENLABS v Českých Budějovicích. K vyšetření jsem využila vzorky DNA získané ze své rodiny.

Abstract:

Recently the term thrombophilia is becoming a current topic. It is an increased precondition for the creation of tromboses and the following complications as the result of increased blood coagulation which could be very serious or even fatal. A timely diagnosis of thrombophilia mutations helps patients to avoid many critical situations (e.g. in case of operations, pregnancy etc.). In these days there are at least 30 genetic laboratories in the Czech Republic which research thrombophilia mutations. Unfortunately this medical examination is covered by insurance companies just in case of indicated symptoms which are under strict criteria. If someone is interested in a medical examination and a doctor does not indicate him with the symptoms, they are forced to pay the examination on their own. There are a few insurance companies which contribute with some amount for these examinations as a part of their preventive programmes (e.g. Česká průmyslová zdravotní pojišťovna, Zdravotní pojišťovna ministerstva vnitra ČR or Zdravotní pojišťovnu Revírní bratrská pokladna). The aim of my bachelor thesis was a practical mastery RFLP-PCR method, PCR ARMS method and a reverse hybridization on strips to detect the most common mutations of thrombophilia in the population of the Czech Republic and deviloving on the issue. In the theoretical part, I focus on a description of the most important thrombophilic mutations in the Czech population and their risks. I also describe particular genetic methods by which each of thrombophilia mutations is being examined in genetic laboratories. My own results of the examination of four major thrombophilia mutations and polymorphs are shown in the practical part. These are the Leiden mutation, prothrombin mutation, MTHFR 1298 and MTHFR 677 polymorphs. For my examinations I used these genetic methods: RFLP-PCR method, PCR ARMS method, reverse hybridization on strips. I made all these methods in the genetic laboratory Genlabs in České Budějovice. For the examinations I used DNA samples of my family.

Keywords

mutace, RFLP-PCR, PCR ARMR, trombofílie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2016

Accessible from:: 3. 5. 2016

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Dagmar Bystřická, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician