Vliv genotoxických a mutagenních látek na topologický stav plasmidové DNA

Bc. Petra BOHÁČOVÁ

Diplomová práce

Influence of genotoxic and mutagenic agents on the topological state of plasmid DNA

Anotace:

Předložená diplomová práce se zaměřuje na hodnocení genotoxických účinků azidu sodného a nitrofurantoinu pomocí molekulárně ? biologických metod. Obě chemikálie se používají jako standardy při Amesově testu. Testy byly provedeny na plazmidech pBS (bakteriální kmen E. coli TOP10) a pPK1 (bakteriálního kmene E. coli HB101), ve variantách in vitro a in situ. K hodnocení poškození bází byly použity reparační enzymy a restrikční endonukleáza BamHI. Pro detekci změn plazmidové DNA byla vybrána gelová elektroforéza. Bylo prokázáno, že 100mM azid sodný a 25mM nitrofurantoin poškozují báze plazmidové DNA. Pravděpodobně se jednalo o delece, ale testováním nebylo toto poškození potvrzeno. Na rozdíl od známých výsledků Amesova testu se molekulárně ? biologickými technikami nepodařilo stanovit koncentrace látek, při kterých začínají mít genotoxické účinky.

Abstract:

The objective of the thesis was to evaluate the genotoxic effect of sodium azide and nitrofurantoin. The molecular ? biological methods were chosen for the detection of damage. Both chemicals are used as standards in Ames test. The tests (in vitro and in situ variations) were applied to pBS plasmid (E. coli strain TOP10) and pPK1 plasmid (bacteria E. coli strain HB101). For the assessment of bases damage, the reparation enzymes and the restriction endonuclease called BamHI were used. The gel electrophoresis was chosen for the detection of plasmid DNA mutation. It was observed that plasmid DNA bases were damaged by 100mM sodium azide and 25mM nitrofurantoin. Probably, there was a deletion, but this effect was not confirmed by the molecular testing. Unlike the known results of Ames test, the initial concentrations of substances with genotoxic effects were not determined.

Klíčová slova

Genotoxicita, chemomutagen, plazmidy, poškození DNA, reparační enzymy.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2011

Zveřejnit od: 22. 4. 2011

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 23. 5. 2011
• Vedoucí: RNDr. Petr Pečinka, Ph.D.

OSTRAVSKÁ UNIVERZITA V OSTRAVĚ

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Učitelství Chemie - Biologie pro střední školy