Stanovení endokanabinoidů pomocí HPLC

Mgr. Žaneta Jurčková

Bakalářská práce

Determination of endocannabinoids using HPLC

Anotace:

V teoretické části bylo cílem vypracovat rešerši o způsobech stanovení endokanabinoidů. Praktická část práce se zabývá vypracováním postupu pro stanovení anandamidu a 2-arachidonoylglycerolu s využitím HPLC s fluorescenční detekcí. Pro stanovení byla použita kolonu Gemini C18 (150 × 4,6 mm; 5 µm) s průtokem 1,5 ml/min. Mobilní fáze byla o složení acetonitril/voda 75:25 (v/v). Extrakce byla provedena diethyletherem a derivatizace pomocí fluorescenčního činidla DBD-COCl. Retenční časy stanovovaných látek byly pro ANA 7,5 min a pro 2-AG 10,9 min. Detekční limit pro ANA byl 7 nM a pro 2-AG byl 12 mM. Byla provedena validace základních parametrů opakovatelnosti a výtěžnosti extrakce.

Abstract:

In the teoretical part of the thesis, the aim was to create summary about various published methods of determination endocannabinoid. Next aim of this thesis was work out the procedure for determination of anandamide and 2-arachidonoylglycerol by the method with the use of HPLC with fluorescence detection. A reversed phase Gemini C18 column C18 (150 × 4,6 mm; 5 µm) was used for separation. Mobile phase was composed of acetonitrile/water 75:25 (v/v) with flow rate 1,5 ml/min. Extraction was performed by liquid-liquid extraction with diethylether and derivatization by fluorescence reagent DBD-COCl. Retention time of determination´s substances was for ANA 7,5 min and for 2-AG 10,9 min. Limit of detection was assessed to be for ANA 7 nM and for 2-AG 12 nM. Basic validation was also done (repatability, bias, extraction recovery).

Klíčová slova

Endokanabinoidy, anandamid, 2-arachidonoylglycerol, HPLC

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 19. 6. 2012
• Vedoucí: doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie