Aplikace elektroanalytických metod v molekulární onkologii

Bc. Sabina Oweisová

Bachelor's thesis

Application of electroanalytical methods in molecular oncology

Abstract:

Tato bakalářská práce se zabývá aplikací elektroanalytických metod – diferenční pulsní voltametrie a chronoamperometrie – pro detekci specifických sekvencí mikroRNA (miRNA). Využívá se při tom elektroaktivního značení volných 3´-konců miRNA pomocí komplexů šestimocného osmia a dusíkatých ligandů, a taktéž hybridizace s komplementární vazební DNA sondou připevněnou na magnetických kuličkách. MiRNA ovlivňuje genovou expresi genů vazbou na mRNA, a bylo prokázáno, že v nádorech může být hladina určitých miRNA zvýšena nebo snížena. Může tak sloužit jako potenciální biomarker. V práci je věnována pozornost detekci konkrétních typů miRNA nejenom v pufru, ale i v totalRNA, tedy ve směsi všech ostatních RNA molekul izolovaných z nádorové buňky. Ukázali jsme, že je možné elektrochemicky rychle a jednoduše detekovat konkrétní sekvenci miRNA v nadbytku totalRNA.

Abstract:

This bachelor’s thesis focuses on application of electroanalytical techniques – differential pulse voltammetry and chronoamperometry – for detection of specific micRNA (miRNA) sequences. For this purpose, we applied labeling of miRNA 3´-end using electroactive six-valent complexes of osmium and nitrogenous ligands, and also hybridization with complementary DNA probe at magnetic beads. MiRNA affects gene expressions by binding to mRNA, and it was shown that miRNA levels may be altered in tumors, making them a potential cancer biomarkers. In this work, the attention is paid not only to detection of specific miRNA in buffer, but also in totalRNA, i.e. a complex mixture of all RNA molecules isolated from cancer cells. We showed that it is possible to electrochemically detect in fast and simple way a specific miRNA sequence in abundance of totalRNA samples.

Keywords

DNA, RNA, MiRNA, Rakovina, Voltametrie, cODN, Elektroda, Autolab, DropSens, HMDE Elektrochemie, Osmium

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 4. 6. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 15. 6. 2015
• Supervisor: Mgr. Martin Bartošík, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Biophysical Chemistry