Motolice Aporocotyle simplex ze svalbardských platýzů Hippoglossoides platessoides.

Šárka HÁJKOVÁ

Bachelor's thesis

Aporocotyle simplex fluke from the flounder Hippoglossoides platessoides in Svalbard.

Abstract:

Ve své bakalářské práci jsem se zabývala motolicemi z platýzů Hippoglossoides platessoides, získaných během expedic na Svalbard v letech 2014 a 2018. Cílem bylo morfologické a molekulární zpracování přivezeného materiálu, díky němuž se mi podařilo potvrdit determinaci nalezených motolic jako Aporocotyle simplex Odhner, 1900. Je to často se vyskytující parazit platýzů, a to především u Hippoglossoides platessoides, dále pak u Limanda limanda a Pleuronectes platessa. Druh A. simplex je geograficky rozšířen v zálivu sv. Vavřince v Kanadě, na západním pobřeží Švédska, v Barentsově a Beringově moři, u pobřeží Kamčatky a Grónska. Z mých výsledků vyplývá, že druh A. simplex je rozšířen i na Svalbardu. V praktické části jsem se zabývala metodami, které mi pomohly charakterizovat zkoumané vzorky. Pozorovala jsem povrchové struktury motolice prostřednictvím skenovacího elektronového mikroskopu SEM JEOL JSM-7401F. Vnitřní orgány byly zviditelněny použitím Mayerova-Schubergova karmínu, což mi umožnilo zhotovit nákres motolice s využitím světelného mikroskopu (Olympus BX51) vybaveného kreslícím zařízením. Dále jsem provedla izolaci DNA s využitím komerčního kitu Exgene Tissue SV mini (GeneAll). Izolovaná DNA (gen pro velkou ribozomální podjednotku, 28S rRNA) byla amplifikována pomocí PCR, získané PCR produkty byly sekvenovány na automatickém sekvenátoru (ABI Prism 3130xl nebo 3730xl, firma SEQme). Nově získané sekvence (celkem tři) byly alignovány v programu Geneious 8.0.5 se sekvencemi dostupnými z GenBanku (64 sekvencí). Fylogenetická analýza vztahů v rámci druhů čeledi Aporocotylidae byla provedena metodou maximální věrohodnosti (Maximum Likelihood) s uživím modelu TPM2u+F+G4 jako nejlepšího. Aporocotyle simplex spadá do samostatné větve společně s A. michaudi, od kterého se však výrazně odlišuje svou morfologií (rozmístění a počet tělních ostnů ve shluku, počet varlat, poměr délky jícnu k délce těla) a zeměpisným rozšířením (A michaudi se vyskytuje v jižním Atlantském oceánu).

Abstract:

In my bachelor thesis I studied trematodes from plaice Hippoglossoides platessoides obtained during expeditions to Svalbard in 2014 and 2018. My goal was morphological and molecular processing of the obtained material, which allowed me to confirm the identification of the flukes as Aporocotyle simplex Odhner, 1900. Aporocotyle simplex is a common parasite of plaice, ocurring mainly in Hippoglossoides platessoides, but also in Limanda limanda and Pleuronectes platessa. The species A. simplex is geographically distributed in the Gulf of St. Lawrence in Canada, off the west coast of Sweden, in the Barents Sea and Bering Sea, off the coast of Kamchatka and Greenland. My results showed that the species A. simplex is widespread in Svalbard. In the practical part, I dealt with methods that helped me to identify the studied specimens. I observed the trematode tegumental surface with aid of a scanning electrom microscope (JEOL JSM-7401F). The trematode internal organs were stained with Mayer-Schuberg carmine, which allowed me to observe and draw the mounted specimens using a light microscope (Olympus BX51) equipped with a drawing attachment. Furthermore, for molecular analysis, the DNA was isolated using the commercial Exgene Tissue SV mini kit (GeneAll). The isolated DNA (the gene for the large ribosomal subunit, 28S rRNA) was amplified by PCR, the obtained PCR products were sequenced on an automated sequencer (ABI Prism 3130xl or 3730xl, by SEQme). The newly acquired sequences (three in total) were aligned in the program Geneious 8.0.5with sequences available from GenBank (64 sequences). Phylogenetic analysis of the species relationships within the family Aporocotylidae was performed using the Maximum Likelihood method with TPM2u + F + G4 used as the best model. Aporocotyle simplex falls into a separate branch together with A. michaudi, from which however, it differs substantially by its morphology (distribution of tegumental spines on body and their number in the clusters, number of testes, ratio of esophagus length to body length) and geographical distribution (A. michaudi occurs in the South Atlantic Ocean).

Keywords

Aporocotyle, motolice, morfologie, molekulární diagnostika, PCR, platýz, Schistosomatoidea

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2019

Thesis defence

• Supervisor: doc. RNDr. Oleg Ditrich, CSc.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Sciences

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician