Využití stanovení Trefoils factors 1, 2 a 3 u gravidních žen. Pilotní studie.

Ing. Gabriela Bilíková

Diplomová práce

Use of measurement of Trefoil factors 1, 2 and 3 of pregnant women. A pilot study.

Anotace:

Úvod: Tzv. trefoils (neboli trojlístkové) proteiny jsou rodina minimálně tří příbuzných nízkomolekulárních peptidů, které ve své struktuře obsahují jednu nebo dvě trojlístkové domény. Právě díky téhle typické struktuře byly takto pojmenovány. TFF1 obsahuje pouze jednu doménu a je nejhojněji tvořen buňkami na povrchu žaludeční sliznice. Sliznice žaludku rovněž produkuje TFF2, jedná se o homodimer obsahující dvě trojlístkové domény. Poslední protein, o kterém budu psát, nese označení TFF3, který je tvořen jednou trojlístkovou doménu a nejhojněji se nachází v gastrointestinálním traklu. Metodika: Byla provedena verifikace zcela nové komerční ELISA soupravy (Biovendor laboratorní medicína a.s.). Pro kvantitativní stanovení těchto proteinů je totiž t.č. nejvhodnější ELISA metoda v sendvičovém uspořádání. Analytické charakteristiky testu byly uspokojivé. Následně byly vyšetřeny gravidní ženy, u kterých byly stanoveny TFF1, TFF2, TFF3, HLA-G, kortikotropin (ELISA, Biovendor laboratorní medicína a.s., Brno, ČR). U všech žen byly doplněny anamnestické a klinické údaje, které byly následně statisticky zpracovány. Výsledky: U metody ELISA byla provedena kalibrace a zjíštěny limity detekce pro jednotlivé TFF. Pro TFF1 byla limitní koncentrace 0,02 ?g/l, pro TFF2 0,04 ?g/l a pro TFF3 0,01 ?g/l. Rovněž byla stanovena přesnost a správnost měření, kdy při stanovení v sérii a mezi sériemi nepřekročil ukazatel hodnoty protilehlé přesnosti 10 %. Při statistickém zpracování vzorků bylo zjíštěno, že k významným vzestupům koncentrací TFF2 (p {$>$} 0,01) a TFF3 (p {$>$} 0,01) došlo ve III. trimestru. Bylo prokázáno, že TFF1 koreluje s TFF2 a TFF3 koreluje s transkortinem. U HLA-G, AFP, hCG, PAPPA, hCG-beta nebyla souvislost prokázána. Závěr: Byla provedena verifikace nové ELISA soupravy na stanovení TFF1, TFF2, TFF3 a vůbec poprvé byly tyto parametry vyšetřeny u žen během gravidity. Zdá se, že TFF2 a TFF3 hrají významnou roli během těhotenství a mohli by souviset s maturací plodu. Vztah mezi výskytem vrozenýchn vývojových vad a koncentracemi uvedených parametrů nebyl prokázán.

Abstract:

Introduction: Trefoil proteins are a family of at least three related low molecular weight peptides. Their structure is comprised of one or two trefoil domains after which the whole family was named. TFF1 contains only one domain and is most frequently produced by the cells of gastric mucosa. TFF2, also produced by gastric mucosa, is a homodimer composed of two trefoil domains. The last protein mentioned in this work, designated TFF3, is formed by one trefoil domain and is mostly found in the gastrointestinal tract. Experimental part: A verification of a new commercial ELISA kit (Biovendor laboratorní medicína a.s.) was performed. Sandwich ELISA is currently the most valuable method for trefoil protein quantification. The analytical characteristics of the test were found to be satisfactory. Subsequently, TFF1, TFF2, TFF3, HLA-G, transcortin (ELISA, Biovendor laboratorní medicína a.s., Brno, ČR) were quantified in samples from pregnant women. All samples were supplemented with medical history and clinical data of the women, which were then statistically analyzed. Results: The ELISA test was calibrated and detection limits for individual TFF proteins were determined. Limiting concentrations were found to be 0,02 ?g/l for TFF1, 0,04 ?g/l for TFF2, and 0,01 ?g/l for TFF3. Additionally, precision and accuracy of the measurements were determined, intraassay or interassay coefficient of variation (CV) were always less than 10 %. Statistical analysis revealed a significant increase in concentrations of TFF2 (p {$>$} 0,01) and TFF3 (p {$>$} 0,01) during the third trimester. It has been shown to correlate witr TFF1 and TFF2, TFF3 correlates with transcortin. The HLA-G, AFP, hCG, PAPP, hCG-beta was not proven relationship. Conclusion: A new ELISA kit for quantification of TFF1, TFF2, TFF3 was validated, and these parameters were for the first time tested in pregnant women. It seems that TFF2 and TFF3 plays a significant role in pregnancy and could be associated with the fetal maturation. The relation between congenital defects and concentrations of the studied paramentters was not observed.

Klíčová slova

Trefoil factor, Trojlístkový faktor, TFF, ELISA

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 17. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 5. 6. 2012
• Vedoucí: prof. MUDr. David Stejskal, Ph.D., MBA

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů