Využití sekvencí inteinového typu při purifikaci heterologně produkovaných proteinů

Jan JUREČKA

Bakalářská práce

Usage of intein-type sequences in heterologous protein purification.

Anotace:

Tato bakalářská práce se věnuje využití sekvencí inteinového typu při proteinové purifikaci. V teoretické části jsou popsány základy metod molekulárního klonování se zaměřením na plasmidové vektory. Dále jsou v teoretické části popsány různé bakteriální expresní systémy, např. sekrece proteinů do inkluzních tělísek. V další kapitole je popsán systém purifikace pomocí inteinové sekvence, mechanismy sestřihu inteinů, jejich šíření v organismu a komerční systémy které inteinové sekvence používají. Cílem experimentální části bylo klonování plasmidu nesoucí gen pro expresi katelicidinu (protein zájmu) zfuzovaný s inteinovou sekvencí a funkční ověření připraveného vektoru v E. coli, tedy transformace, heterologní exprese, purifikace a detekce proteinového produktu. Klonování bylo úspěšné a exprese a purifikace po překonání určitých komplikací také.

Abstract:

This bachelor's thesis discusses the usage of intein-type sequences in protein purification. The theoretical part describes the basics of molecular cloning, focusing on plasmid vectors. Next, the theoretical part describes various bacterial expression systems, for example protein secretion into inclusion bodies. The next chapter describes the system of purification using intein sequences, mechanisms of intein cleavage, their spread in the organism and commercial systems that utilize intein sequences. The goals of the experimental part were cloning the plasmid carrying a gene for cathelicidin expression (target protein) fused with an intein sequence and functional verification of the prepared vector in E. coli, i.e. transformation, heterologous expression, purification and detection of the protein product. The cloning was successful and after overcoming certain complications, so was the expression and purification.

Klíčová slova

intein, proteinový konstrukt, purifikace, katelicidin, plasmid, chitin-vazebná doména, exprese

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 26. 4. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Mgr. Petr Galuszka, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie