Modely pro studium diferenciace střevního epitelu in vitro

Veronika FRYZELKOVÁ

Bachelor's thesis

Models for studying the differentiation of intestinal epitelium in vitro

Abstract:

Nádorová buněčná linie HT-29 odvozená od adenokarcinomu lidského tlustého střeva je za standardních kultivačních podmínek považována za pluripotentní intestinální buněčnou linii. V experimentálních podmínkách po ovlivnění buněk látkami, mezi které se mimo jiné řadí i butyrát sodný, dochází k indukci procesu buněčné diferenciace. Tato buněčná linie je na základě svých vlastností využívána jako in vitro model diferenciace enterocytů. Bakalářská práce je zaměřena na ověření diferenciace buněčné linie HT-29 po ovlivnění různými koncentracemi butyrátu sodného a následné stanovení nejvhodnějších podmínek, při kterých dochází k nejvyššímu stupni diferenciace. Výsledky jsou vyhodnocovány pomocí specifických markerů aktivity enzymu alkalické fosfatázy a expresi proteinů villinu a E-cadherinu. V teoretické části je shrnut histologický a embryonální vývoje trávicí trubice a následně představeny in vivo a in vitro modely diferenciace střevního epitelu. Praktická část zahrnuje metodiku, ve které je popsáno vlastní měření aktivity alkalické fosfatázy a zjištění exprese E-cadherinu a villinu pomocí imunocytochemie. Dále jsou zde uvedeny samotné výsledky prováděného experimentu, podle kterých se podařilo prokázat, že k nejvyššímu stupni diferenciace u buněčné linie HT-29 dochází po ovlivnění butyrátem sodným o koncentraci 5 mM a inkubační době 72 hodin.

Abstract:

The human HT-29 adenocarcinoma cell is considered to be a pluripotent intestinal cell line under standard culture conditions. The differentiation proces is induced by various substances, such as a sodium butyrate. Due to its properties, this cell line is used as an in vitro model of enterocytic differentiation. The thesis is focused on the verification of HT-29 cell line differentiation after treatment by different concentrations of sodium butyrate and the determination of the most suitable conditions in which the highest degree of differentiation occurs. The final results are demonstrated by using specific markers enzyme activity of alkaline phosphatase and protein expression of E-cadherni and villin. The theoretical part summarizes information about histological and embryonic development of digestive system. Furthermore, this part describes in vivo and in vitro models of differentiation. The practical part contains at first a methodology describing the measurement of alkaline phosphatase activity and detection of E-cadherin and villin expression by imunocytochemistry. In this part are also the results of the experiments. It has been demonstrated that the highest degree of differentiation occured after treatment with 5 mM sodium butyrate and 72 hours incubation.

Keywords

HT-29, butyrát sodný, buněčná diferenciace, markery diferenciace, enterocyty, buněčná kultura, villin, E-cadherin, alkalická fosfatáza, střevní epitel

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2018

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Kateřina Čížková, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology