Molekulární analýza gamma a delta řetězců T-buněčných receptorů přítomných u expandovaných populací u pacientů s B buněčnými malignitami

Bc. Martin Kubeš

Master's thesis

Molecular analysis of gamma and delta chains of the T-cell receptor in expanded cells in patients with B cell malignancies

Abstract:

γδ T-lymfocyty jsou skupinou T-lymfocytů, které se vyznačují expresí γδ TCR. Tento receptor je schopný rozpoznávat mnohé neklasické antigeny, nezávisle na systému MHC. U γδ T-lymfocytů byly kromě antivirových a antibakteriálních funkcí objeveny také schopnosti ničit nádorové buňky. Dosavadní výsledky ukazují, že cytotoxicita proti myelomovým buňkám nebo buňkám CLL je pravděpodobně zprostředkovaná pomocí TCR. Byla provedena analýza CDR3 regionů γδ TCR pro řetězce δ1, δ2 a δ3 a řetězce čtyř rodin γ: γ1-8, γ9, γ10 a γ11. Výsledky odhalily statisticky významné rozdíly v distribuci klonality jednotlivých γ a δ řetězců jak pro populaci δ1 v rámci diagnózy CLL, tak pro populaci δ2 v rámci diagnóz MGUS, MM, MBL i CLL. Dále byla objevena výrazně snížená úroveň polyklonality pro populaci δ3 jak u starých zdravých dárců, tak u pacientů se všemi diagnózami. Pro rodinu γ1-8 byla popsána snížená míra polyklonality u pacientů s MBL. V rámci rodiny γ9 byla popsána výrazná míra absence γ9 řetězce u pacientů s MBL a CLL, oproti pacientům s MGUS a MM, kteří si zachovávali polyklonální nebo oligoklonální charakter distribuce γδ TCR. V rámci rodiny γ10 byla zachována polyklonální distribuce s mírným snížením u diagnózy CLL a v rámci rodiny γ11 nebyl tento řetězec v žádném ze studovaných vzorků detekován. Z výsledků lze usuzovat na roli γδ T-lymfocytů při onemocněních B-buněčnými malignitami a jejich prekancerózních stádiích na základě změn klonality γδ TCR v závislosti na typu onemocnění.

Abstract:

γδ T-lymphocytes represent a group of T-lymphocytes which express the γδ TCR. This receptor is capable of recognizing many non-classical antigens, independently on MHC. In γδ T-lymphocytes, among their ability to recognize either viral or bacterial pathogens, there was described also their ability to kill tumour cells. So far, results show that the cytotoxicity against myeloma cells or CLL cells is probably mediated through the TCR. The analysis of CDR3 regions of the γδ TCR for the δ1, δ2 and δ3 chains and for the four families of γ chain: γ1-8, γ9, γ10 a γ11 has been done. The results showed statistically significant differences in γ a δ chains distribution in δ1 population for CLL diagnosis, in δ2 population for MGUS, MM, MBL and CLL diagnosis. Also, a highly reduced level of polyclonality of the δ3 chain in elderly healthy donors and all the diagnoses was shown. For the γ1-8 family, the decrease of polyclonality in patients with MBL was shown. For the γ9 family, highly significant absence of chain γ9 in patients with MBL and CLL was shown, which was the opposite to patients with MGUS and MM, which kept their repertoire of the γδ TCR as polyclonal or oligoclonal. For the γ10 family the polyclonal repertoire was found in all the diagnoses, with a moderate restriction in CLL diagnosis. For the γ11 family no presence of this chain was detected in any studied sample. The results point to the involvement of γδ T-lymphocytes in B-cell malignant diseases and their pre-malignant stages based on the presence of changes in γδ TCR clonality according to the described types of diseases.

Keywords

Gamma delta T-lymfocyty, mnohočetný myelom, MGUS, chronická lymfocytární leukémie, monoklonální B-buněčná lymfocytóza, TCR, Spektratypování, Gamma delta T-lymphocytes, multiple myeloma, chronic lymphocytic leukaemia, monoclonal B-cell lymphocytosis, Spectratyping

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 1. 2016

Thesis defence

• Date of defence: 10. 2. 2016
• Supervisor: Mgr. Andrea Knight, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Experimental Biology / Molecular Biology and Genetics