Charakterizace rodiny proteinů o molekulové hmotnosti 18,7 a 19 kDa ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}

Bc. Nina RŮŽIČKOVÁ

Master's thesis

Characterization of 18,7 and 19 kDa groups of secreted proteins in the salivary glands of the castor bean tick \kur{Ixodes ricinus}

Anotácia:

Podařilo se vytvořit rekombinantní protein c90 a polyklonální protilátky proti tomuto proteinu. Byla připravena dvouvláknová RNA pro pokusy s RNA interferencí. Z tkání získaných z klíšťat napíchaných touto dsRNA po pěti dnech sání byly připraveny vzorky pro RT-PCR a Western blot. Dosažené výsledky naznačovaly, že protein c90 se uplatňuje v těle klíštěte v reakci na poranění, a proto byl uskutečněn pokus s klíšťaty napíchanými vodou, G+ bakteriemi a G- bakteriemi. V průběhu získávání dat pro tuto diplomovou práci bylo zjištěno, že zkoumané proteiny mají schopnost tvořit multimery, a že při RNA interferenci nedochází k vypnutí genu, ale naopak k jeho upregulaci. Ve světle těchto informací společně s bioinformatickou analýzou vyvstává možný závěr, že proteiny o molekulové hmotnosti 18,7 a 19 kDa jsou pravděpodobně důležité ve fyziologii klíštěte. Tyto proteiny mají s největší pravděpodobností strukturní funkci v těle klíštěte a jejich produkce může být reakcí na poranění, v případě RNAi vpichu, spíš než v antiimunitě. Současně ale i skutečnost, že u normálního klíštěte jsou proteiny 18,7 kDa exprimované ve větší míře na začátku sací periody nabízí k úvaze to, že i v hostiteli mají tyto proteiny přece jen svou funkci.

Abstract:

The recombinant protein c90 was prepared and polyclonal antibodies against this protein were raised. The dsRNA was made for the experiments with RNA interference. The samples from dissected tissues of dsRNA silenced ticks were tested by RT-PCR and Western blot. Results suggest that protein c90 plays a role in the tick body during the reaction to injury. Finally, another experiment with injection of water, G+ and G- bacteria into the ticks was realized. It was found that the members of the 18,7 kDa protein family can create multimers. The overexpression of silenced genes was observed during RNAi experiments despite of expected inhibition of c90 production. These results together with the bioinformatics analysis could mean that these proteins are important the physiology of tick probably as a reaction to injury. However c90 protein is produced only in the first phase of feeding which could mean that it has some role in the tick-host interaction as well.

Kľúčové slová

proteiny, slinné žlázy, klíště, Ixodes ricinus

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 7. 1. 2009

Zverejniť od: 7. 1. 2009

Identifikátor: 6345

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 29. 1. 2009
• Vedúci: doc. RNDr. Jan Kopecký, CSc.

University of South Bohemia in České Budějovice

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biology / Clinical Biology