In vitro model kryptokokové hypoxické adaptace v lidské tkáni

Bc. Ivana HORÁKOVÁ

Master's thesis

In vitro model of cryptococcal hypoxic adaptation in human tissue

Abstract:

Ve své diplomové práci jsem se věnovala vlivu složení média na morfoligii buněk Cryptococcus neoformans za různých podmínek aerace. Cílem práce bylo napodobit v laboratorních podmínkách různé podmínky růstu v lidské tkáni a korelovat parametry těchto podmínek s orientačním měřítkem hypoxické adaptační reakce, kterým je u C. neoformans velikost buněk. Základním kultivačním médiem bylo médium RPMI 1640, které bylo postupně modifikováno různými koncentracemi glukózy, úpravou PBS, přídavkem železa, přídavkem agaru pro úpravu viskozity média a dále přídavkem hovězího sérového albuminu a lidského séra. Různé stupně aerace byly dány odlišnými objemy kultivačního média a také celkovou dobou kultivace buněk. Po uplynutí kultivační doby byl z kultivované buněčné suspenze zhotoven mikroskopický preparát, který byl pozorován pod mikroskopem, a následně byly pořízeny fotografie, na kterých byl měřen průměr buněk programem ImageJ pro analýzu dat, získaná data byla statisticky zpracována Studentovým t - testem. Z výsledků mé práce vyplývá, že statisticky nejvýznamnější vliv na velikost buněk měl přídavek agaru, který výrazně změnil velikost kultivovaných buněk, při kultivaci buněk v médiu s agarem byla velikost buněk výrazně menší než při jiných kultivacích. Z tohoto hlediska byl nejvýznamnější i přídavek železa, který naopak způsobil nárůst průměrných velikostí buněk. Největších velikostí buňky dosahovaly při kultivaci v objemu reprezentujícím stav mírné hypoxie a zároveň při kultivaci v médiu obohaceném o 1% glukózu, která zajišťovala buňkám dostatečnou výživu.

Abstract:

In my master thesis I focused on the influence of varied composition of culture medium on cellular morphology in Cryptococcus neoformans under different conditions of aeration. Aim of the work was to simulate different paramaters of cryptococcal growth in human tissue under laboratory conditions and follow morphological changes of C. neoformans typical for hypoxia response under these conditions. Cell size was used as a rough measure of hypoxia response. The basic culture medium was RPMI 1640 medium which was modifies by various concentrations of glucose, buffering by PBS, addition of iron, adition of agar medium to adjust the viscosity and also addition of the bovine serum albumin and human serum. Various levels of aeration were achieved by using different volumes of culture medium and cultivation time. After the end of the culture period cell suspension was observed under photographs were taken and evaluated by ImageJ software for cell diameter measurement, data were statistically analyzed by Student's t - test. The results of my thesis showed that addition of agar caused the most statistically significant change in cell size,i.e. cells were much smaller than without agar supplement. The significat influence was observed after the addition of iron, which in turn caused an increase in the average size of cells. Largest cell size was reached hen cells were cultured in a volume representing the state of mild hypoxia and also when cultivated in a medium supplemented with 1% glucose, which provided better nutrition to the cells.

Keywords

Cryptococcus neoformans, hypoxie, RPMI médium, kultivace

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 2. 8. 2013

Accessible from:: 2. 8. 2013

Thesis defence

• Date of defence: 26. 8. 2013
• Supervisor: MUDr. Vladislav Raclavský, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology