Nativní a denaturující elektroforéza proteinů krevního séra.

Van Hai NGUYEN

Bachelor's thesis

Native and denaturing serum protein electrophoresis.

Abstract:

Tato bakalářská práce se zabývá nativní a denaturující elektroforézou sérových proteinů člověka a vybraných druhů zvířat. Cílem mé práce je optimalizace přípravy gelů a vzorků pro výše uvedené metody, zpracování získaných výsledků pomocí zobrazovacího systému AlphaImager a následné porovnání výsledků a snadnosti provedení včetně zhodnocení přínosu těchto metod. V této práci byly konkrétně použity následující metody: horizontální elektroforéza proteinů na agarosovém gelu, vertikální nativní elektroforéza na polyakrylamidovém gelu (PAGE) a vertikální denaturující elektroforéza na polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsíranu sodného (SDS-PAGE). Na základě vyhodnocení získaných elektroforeogramů lze říci, že nevýhody agarosového gelu oproti polyakrylamidového jsou jeho tloušťka, nestálost a malá rozlišovací schopnost. Při separaci na agarose dochází také k elektroendosmóze. Naopak jeho výhodou je snadná příprava a netoxicita. Koncentrace 6% polyakrylamidu pro nativní PAGE elektroforézu poskytla nejlepší elektroforeogramy. Nativní PAGE oproti SDS-PAGE sice poskytuje z analytického úhlu pohledu méně podrobné výsledky, avšak z pohledu klinické biochemie je její nespornou výhodou snadnější a jednoznačnější vyhodnocení a interpretace získaných výsledků, čehož se také využívá v rutinních aplikacích.

Abstract:

My bachelor's thesis examines native and denaturing electrophoresis of humans' and selected species' serum proteins. The aim of this work is an optimalization of gel preparation and samples for given methods, processing of gained data by imaging system Alpha Imager, and comparing the results and ease of performance including benefit of these methods. The methods done in this work are a horizontal electrophoresis of proteins on agarose gel and vertical native PAGE and vertical denaturing SDS-PAGE electrophoresis of proteins. Based on the gained electropherograms it can be said that the disadvantages of agarose gel opposite to polyacrylamide are its width, instability, and low resolution. An electroendosmosis occurs during the separation as well. On the contrary agarose's advantages are easy preparation and non-toxicity. Concentration of 6% polyacrylamide for native PAGE electrophoresis provides the best electropherograms. From the analytical point of view native PAGE in opposite to SDS-PAGE provides less detailed results, nevertheless from the perspective of clinical biochemistry its indisputable advantage is easier and more definite evaluation and the interpretation of obtained results which also is used in routine applications.

Keywords

Nativní PAGE, SDS-PAGE, elektroforéza bílkovin, krevní sérum, agarosový gel, elektroforeogoram

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 24. 4. 2017

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Michal Haluzík, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Chemistry