Vliv přídavku glycerolu v různých fázích výroby beraních inseminačních dávek na jejich následné kvalitativní parametry po rozmrazení

Bc. Anna Boudová

Master's thesis

Influence of glycerol addition in different phases of ram insemination doses processing on subsequent sperm qualitative parameters after thawing

Abstract:

Cílem této diplomové práce bylo zhodnotit vliv přídavku glycerolu při přípravě inseminačních dávek na zachování oplozovací schopnosti spermií u beranů. Během experimentu byly použity vzorky ejakulátu beranů plemene valašská ovce. Valašská ovce patří mezi jeden z geneticky ohrožených druhů a proces kryokonzervace je pro záchranu těchto cenných zvířat rozhodující. Oplozovací schopnost spermií byla zjišťována pomocí CASA softwaru a průtokové cytometrie. Za oplození schopné spermie byly považovány ty, které neměly poškozenou cytoplazmatickou membránu, měly vysokou celkovou a progresivní motilitu, neměly poškozený akrozom a měly zachovanou mitochondriální aktivitu. Hodnoceny byly také vlivy působící na jednotlivé parametry. Sperma bylo hodnoceno po ekvilibraci a po rozmrazení. Byla porovnávána metoda okamžitého přídavku glycerolu při ředění, který byl součástí ředidla Andromed (obsah 6-7 % glycerolu) s modifikací, kdy byl glycerol přidán těsně před mrazením. Ihned po rozmrazení byly zjištěny signifikantní rozdíly pouze v rámci hodnoceného parametru poškození akrozomu a mitochondriální aktivity. Průkazně lepších výsledků dosáhl ejakulát, kdy byla použita metoda s přídavkem glycerolu těsně před zmrazením, který vykazoval vysokou mitochondriální aktivitu 43,3 ± 2,69 % a poškození akrozomu 22,29 ± 1,13 % Hodinu a dvě hodiny po rozmrazení byly zjištěny signifikantní rozdíly mezi všemi jednotlivými parametry hodnocenými pomocí průtokové cytometrie. Jako průkazně horší se jeví metoda s požitím ředidla s obsahem glycerolu. Při použití této metody mělo hodinu po rozmrazení poškozený akrozom 25,92 ± 1,13 % spermií a vysoká mitochondriální aktivita byla zjištěna pouze u 33,25 ± 2,69 %. Získané výsledky poskytly slibné předpoklady pro zlepšení kvality kryokonzervovaného ejakulátu námi modifikovanou metodou. Proto je důležité ověřit účinek této metody formou inseminace.

Abstract:

The aim of this diploma thesis was to evaluate the effect of the addition of glycerol in the preparation of insemination doses for the preservation of the fertilizing ability of sperm in rams. During the experiment, samples of Wallachian sheep rams ejaculate were used. Wallachian sheep belog to one of the genetically endangered species and thy cryopreservation is important for the rescue of these valuable animals.Sperm fertilization capacity was determined using CASA software and flow cytometry. Fertilizable sperm were considered to be those that did not have damaged cytoplasmic membrane, had high overall and progressive motility and retained mitochondrial activity, and no damaged acrosome. The influences acting on individual parameters were also evaluated. Sperm were evaluated after equilibration and thawing. The method of immediate addition of glycerol at dilution, which was an ingredient of the Andromed diluent (6-7% glycerol content), was compared with a modification, in which glycerol was added just before freezing.Significant differences immediately after thawing were found only within the evaluated parameter of acrosome damage and mitochondrial activity. Significantly better results were achieved with the ejaculate, when the method with the addition of glycerol just before freezing was used, which showed a high mitochondrial activity of 43.3 ± 2.69 % and acrosome damage of 22.29 ± 1.13%. One hour and two hours after thawing, significant differences were found among all individual parameters evaluated by flow cytometry. The method with use of a diluent containing glycerol appears to be significantly worse. Using this method, 25.92 ± 1.13% sperm showed damaged acrosome and high mitochondrial activity was found in only 33.25 ± 2.69 % of sperm one hour after thawing.

Keywords

CASA, kryokonzervace, sperma, průtoková cytometrie

Keywords

flow cytometry, CASA, cryopreservation, semen

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 26. 4. 2021

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Martin Ptáček, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Animal Science / Animal Science