Zobrazování oxidativního stresu v lidských nádorových buňkách

Gaukhar ZHANYSBAYEVA

Bakalářská práce

Imaging of oxidative stress in human cancer cells

Abstract:

The objectives include the investigation of oxidative stress in three human cancer cell lines (U-937, THP-1, HL-60) using different technologies. U-937 is a pro-monocytic human myeloid leukaemia cell line, while the THP-1 cell line is a type of human monocytic leukaemia that was obtained from the blood of an individual with acute monocytic leukaemia. The HL-60 cell line was obtained from a patient with acute myeloid leukaemia. Differentiation of the cells was induced by phorbol 12-myristate-13-acetate (PMA), which led to the formation of reactive oxygen species in the cells. The formation of this reactive oxygen species was detected using charge-coupled device (CCD imaging), Photomultiplier tube (PMT), Western blotting, and electron paramagnetic resonance spectroscopy (EPR). Spontaneous ultra-weak photon emission imaging was detected by CCD camera and PMT in different states. The formation of carbon-centred radicals was measured by EPR spin-trapping spectroscopy. Furthermore, the potential usage of natural compounds for their antioxidant effects in different cell lines was studied using Western blotting.

Abstract:

Cílem této práce je zkoumaní oxidačního stresu u tří lidských nádorových buněčných linií (U-937, THP-1, HL-60) pomocí různých technologií. U-937 je promonocytární buněčná linie lidské myeloidní leukemie, zatímco buněčná linie THP-1 je typ lidské monocytární leukemie, která byla získána z krve jedince s akutní monocytární leukemií. Buněčná linie HL-60, byla získána od pacienta s akutní myeloidní leukémií. Diferenciace buněk byla indukována pomocí phorbol 12-myristát-13-acetátu (PMA), což vedlo k tvorbě reaktivních forem kyslíku v buňkách. Tvorba těchto reaktivních forem kyslíku byla detekována pomocí zobrazovacího zařízení s nábojovou vazbou (CCD), fotonásobiče (PMT), Western blotu a spektroskopie elektronové paramagnetické rezonance (EPR). Pomocí CCD kamery a PMT bylo v různých stavech detekováno spontánní zobrazování ultra slabých fotonů. Zatímco tvorba radikálu s centrovaným uhlíkem byla měřena v EPR spektroskopii. Kromě toho bylo studováno potenciální využití přírodních sloučenin pro jejich antioxidační účinky v různých buněčných liniích pomocí Western blottingu.

Keywords

U-937, THP-1, HL-60 buněčné linie, Reaktivní formy kyslíku, volné radikály, zařízení s nábojovou vazbou (CCD), fotonásobič (PMT), Western blot, spektroskopie elektronové paramagnetické rezonance (EPR), bioaktivní sloučeniny.

Jazyk práce: angličtina

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2023

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Ankush Prasad, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biotechnologie a genové inženýrství / Biotechnologie a genové inženýrství