Transvaginální aspirace oocytů u klisen

Alexandra Berková

Bachelor's thesis

Transvaginal aspiration of oocytes in mares

Abstract:

V dnešní době se v reprodukci klisen neustále zdokonalují techniky pro získání co nejvíce potomků z výborných zvířat. Specializované metody reprodukce jsou závislé na zisku oocytů od klisen. Tato práce je literární rešerše a shrnuje nejnovější poznatky o metodě transvaginální aspirace oocytů, neboli ovum pick up, což je jedna z možností sběru oocytů. K zisku oocytů je možné použít jatečné vaječníky, tudíž již mrtvé klisny, nebo různými způsoby živé klisny. Zatím nejúčinnější způsob je získání oocytů z jatečných vaječníků, ten se nyní využívá zejména k výzkumným účelům, jelikož poskytuje nejvíce oocytů. Oocyty se z vaječníku odebírají pitvou a rozřezáním tkáně vaječníku, seškrabováním granulózních buněk folikulu a aspirací. Aspirace může probíhat s, anebo bez proplachování folikulu. Snaha chovatelů je samozřejmě využívat živé klisny jako dárkyně oocytů, což umožňuje jejich opakované odebírání. Nejvíce invazivní metoda získávání oocytů je punkcí v boku klisny trokarem a poté aspirace folikulů jehlou, nebo laparoskopicky. Pomocí transvaginálního ultrazvuku se mohou získat od klisen oocyty bez větších poranění, vpich je proveden pouze stěnou pochvy a opakovat je lze už po 10 ti dnech, ideální je však interval 2 až 4 týdny, a to i několikrát za sebou aniž by docházelo k poruchám zdraví, nebo funkce pohlavních orgánů. Oocyty se odebírají v průběhu celého roku, nezávisle reprodukčním období, nebo na fázi estrálního cyklu. Více či méně se vyskytují folikulární vlny u březích klisen a i ty se využívají jako dárkyně oocytů. Klisny se před aspirací nijak hormonálně nepřipravují, bezprostřední příprava klisny před aspirací spočívá v převedení do fixační klece, nebo znehybnění v boxe a aplikace sedativ a epidurální anestezie. Dále se klisně zaváže ocas, vyprázdní konečník a důkladně se omyje perineální oblast. Poté se pochvou vede ultrazvuková sonda s vodičem jehly, vodičem prochází jehla napojená na vývěvu, která zajišťuje podtlak a tím sání folikulu. Aspirací je možné získat oocyty ze dvou typů folikulů, z preovulačních a nezralých. Preovulační folikul se aspiruje 20 až 36 hodin po podání hCG, úspěšnost zisku oocytů z těchto folikulů je až 80 %. V nepřítomnosti preovulačního folikulu se aspirují všechny viditelné folikuly na vaječnících. Výtěžnost malých oocytů je mnohem nižší, ve srovnání s preovulačními folikuly a přesto většina oocytů, které je možné získat od klisny pochází z malých folikulů. Oocyty z malých folikulů se následně musí nechat 24 až 36 hodin maturovat v kultivačním mediu, než je možné je použít k ICSI, nebo transferu oocytů.

Abstract:

In this day and age, methods used in mare reproduction are steadily being perfected to enable receiving as many descendants of optimal animals as possible. The specialized methods of reproduction depend on recovering oocytes from the mares. This work is a literature search and it resumes the newest pieces of knowledge about the method of transvaginal oocyte recover, also called ovum pick up, which is one of the possible ways of obtaining oocytes. To receive the oocytes we may use slaughterhouse ovaries, therefore ones of a dead mare, or we may get them from a living one. So far the most efficient one is the slaughterhouse method; it is nowadays used mostly for research purposes, as it provides most oocytes. The oocytes are dissected from the ovary by cutting its tissue, scraping granulosa follicular cells and aspiration. Aspiration can proceed with, or without rinsing the follicle. The breeders naturally strive to use living mares as oocytes donors, which enables repeated withdrawing. The most invasive way of receiving the oocytes is a trocar puncture through the mare´s flank followed by aspiration of follicles either with a syringe or laparoscopically. Thanks to the transvaginal ultrasound the oocytes can be withdrawn without hurting the mare significantly; the puncture pierces only the vulva wall and the procedure can be repeated after only ten days, although the interval of two to four weeks is recommended, so that the mare´s health or functioning of its genitals are not endangered. Oocytes can be withdrawn during the whole year, independently of the reproduction period or phase of the estrous cycle. Follicular waves more or less often appear in pregnant mares, and those are used as oocyte donors. Mares are in no way being hormonally prepared for the aspiration; none of the attempts to provoke superovulation or to increase the number of follicles on ovaries proved to be successful in providing more oocytes. The proximate preparation of the mare consists of bringing the mare into a fixation cage or its immobilization in a horsebox, applying sedatives and epidural anesthesia. Then its tail is bandaged, the rectum is cleaned out and the perineal area is washed. After this an ultrasound exploring coil with an awl is lead through its vulva; another awl is connected with a vacuum pump, which provides under pressure and sucking of the follicle. Aspiration provides oocytes from two types of follicles: preovulation and immature. Preovulation follicle is aspired from 20 to 36 hours after applying hCG, and obtaining oocytes from these follicles is successful in 80 % of the cases. In the absence of preovulation follicles all the visible follicles on the ovaries are aspired. Recovery rate of the oocytes is much smaller in comparison with pre-ovulation follicles, and yet most of the oocytes that can be received from a mare come from the little follicles. Oocytes from the little follicles need to mature in a cultural medium for 24 untill 26 hours before they can be used to ICSI or oocyte transfer.

Keywords

klisna, reprodukce, ultrasonografie, aspirace, oocyt

Keywords

mare, reproduction, ultrasonography, aspiration, oocyte

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 4. 2016

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Bachelor programme / field:
Agriculture, Horticulture and Rural Development / Animal Production