Monolitické enzymové reaktory pro bioanalýzu

Mgr. Andrea Uríčková

Bakalářská práce

Monolithic enzymatic reactors for bioanalysis

Abstract:

Immobilized enzyme reactors have found applications in a wide range of fields. One of the most important fields of immobilized enzyme reactors is protein digestion in proteomic research. The theoretical part of this thesis deals with the immobilization techniques including for example covalent immobilization using monoliths based on glycidyl methacrylate. Experimental section is focused on the preparation of monolithic capillary columns and covalent immobilization of trypsin. The prepared column was subsequently used as the enzyme reactor for digestion of standard proteins cytochrome c and BSA. Collected fractions of peptide fragments were analyzed by MALDI/MS.

Abstract:

Imobilizované enzymové reaktory nacházejí aplikace v širokém rozsahu oblastí. Jeden z nejvýznamnějších oborů imobilizovaných enzymových reaktorů je proteinové štěpení v proteomickém výskumu. Teoretická část této bakalářské práce se zabývá imobilizačními technikami, mezi které patří například kovalentní imobilizace s použitím monolitů na bázi glycidyl metakrylátu. Experimentální část je pak zaměřená na přípravu monolitických kapilárních kolon a kovalentní imobilizaci trypsinu. Připravená kolona byla následně použitá jako enzymový reaktor pro štěpení standardních proteinů cytochromu c a BSA. Nasbírané frakce peptidových fragmentů byli analyzované pomocí MALDI/MS. Imobilizované enzýmové reaktory nachádzajú aplikácie v širokom rozsahu oblastí. Jeden z najvýznamnejších oborov imobilizovaných enzýmových reaktorov je proteínové štiepenie v proteomickom výskume. Teoretická časť tejto bakalárskej práce sa zaoberá imobilizačnými technikami, medzi ktoré patrí napríklad kovalentná imobilizácia s použitím monolitov na bázi glycidyl metakrylátu. Experimentálna časť je potom zameraná na prípravu monolitických kapilárnych kolón a kovalentnú imobilizáciu trypsínu. Pripravená kolóna bola následne použitá ako enzýmový reaktor pre štiepenie štandardných proteínov cytochrómu c a BSA. Nazbierané frakcie peptidových fragmentov boli analyzované pomocou MALDI/MS.

Klíčová slova

Peptidové mapování, Kovalentní imobilizace, Enzymový reaktor, Hmotnostní spektrometrie Peptidové mapovanie, Kovalentná imobilizácia, Hmotnostná spektrometria Peptide mapping, Covalent immobilization, Enzyme reactor, Mass spectormetry

Jazyk práce: slovenština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 17. 6. 2013
• Vedoucí: Mgr. Jana Křenková, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie