Imobilizace hrachové aminoxidasy

Bc. Tereza SMOLKOVÁ

Master's thesis

Immobilization of pea aminoxidase

Abstract:

Biogenní aminy vznikají především dekarboxylací příslušných aminokyselin a jsou dále oxidovány aminoxidasami na příslušné aldehydy. Biogenní aminy se přirozeně vyskytují v potravinách, přičemž jejich množství se může výrazně zvýšit mikrobialní kontaminací. Ve vyšších koncentracích jsou biogenní aminy (zejména histamin a tyramin) toxické. Pro širší využití enzymů je limitujícím faktorem jejich teplotní stabilita, proto jsou vyhledávány metody pro zvýšení termostability. Jedním z řešení je navázání enzymu na vhodný polymerní nosič. V rámci experimentální části práce byly vypěstovány hrachové klíčky, z nichž byla s následně izolována a purifikována hrachová aminoxidasa (PsAO). Získaná aminoxidasa byla imobilizována na vybraný nosič. Dále byla změřena pomocí spřažené peroxidasové reakce substrátová specifita a kinetika reakcí vybraných aminů imobilizované PsAO. Optimální pH imobilizované PsAO a její stabilita v čase byly porovnány s neimobilizovaným enzymem.

Abstract:

Biogenic amines are formed primarily by decarboxylation of the respective amino acids and are further oxidized by the amine oxidases to the corresponding aldehydes. Biogenic amines are naturally occurring in food. Their concentration can be increased by microbial contamination. At higher concentrations, biogenic amines are toxic, especially histamine and tyramine. For the wider use of enzymes, the limiting factor is their temperature stability, therefore methods for increasing thermostability are being sought. One solution is to bind the enzyme to a suitable polymeric carrier. In the experimental part of the work pea seedlings were grown and pea amine oxidase (PsAO) subsequently isolated and purified. The obtained amine oxidase was immobilized on a selected support. The substrate specificity of immobilized PsAO as well as the kinetics of the reaction of selected amines were measured by using a coupled peroxidase reaction. The optimal pH of immobilized PsAO and its stability over time were compared with non-immobilized enzyme.

Keywords

Hrachová aminoxidasa, imobilizace enzymu, zvýšená stabilita enzymu

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 11. 5. 2020

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Jan Frömmel, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry