Cielené stanovenie vybraných klinicky významných proteínov pomocou cielenej proteomiky s využitím kvapalinovej chromatografie v spojení s hmotnostnou spektrometriou

Bc. Laura ŽABKOVÁ

Diplomová práce

Targeted determination of selected clinically significant proteins using targeted proteomics using liquid chromatography in conjunction with mass spectrometry.

Anotace:

Táto diplomová práca sa zaoberá kvantifikáciou peptidov pomocou hmotnostnej spektrometrie (MS), vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC), a UV-VIS spektrometrie. Taktiež sa zaoberá využitím kalibrácie metódy pomocou bicinchonínovej kyselinovej skúšky (BCA assay). Kvantifikácia peptidov je dôležitá pre pochopenie mnohých fyziologických a patologických procesov v živých organizmoch, a preto má významný vplyv na biológiu a medicínu. Teoretická časť práce skúma základné princípy MS, HPLC, UV-VIS spektrometrie a BCA assay, vrátane ich výhod a obmedzení. MS poskytuje vysokú citlivosť a špecifickosť, ktorá umožňuje detekciu peptidov v nízkych koncentráciách. HPLC umožňuje efektívnu separáciu peptidov podľa ich fyzikálno-chemických vlastností, čím zvyšuje presnosť kvantifikácie. BCA assay je jednoduchá a rýchla metóda na meranie celkového obsahu proteínov a peptidov pomocou farebnej reakcie. UV-VIS spektrometria, ktorá ponúka presné a citlivé merania, ktoré sa zakladajú na presnom a citlivom meraní absorpcie alebo emitácie elektromagnetickej energie peptidmi. Praktická časť práce sa zameriava na aplikáciu týchto metód pri kvantifikácii peptidov v rôznych biologických vzorkách. Výsledky experimentov ukázali, že kombinácia UV-VIS spektrometie a MS prináša synergické výhody, ktoré umožňujú detailnú analýzu a presnú kvantifikáciu peptidov. BCA assay bola využitá ako doplnková metóda na rýchle a jednoduché stanovenie koncentrácie peptidov.

Abstract:

This thesis addresses the quantification of peptides using mass spectrometry (MS), high-performance liquid chromatography (HPLC), and UV-VIS spectrometry. It also examines the calibration of methods using the bicinchoninic acid assay (BCA assay). The quantification of peptides is crucial for understanding many physiological and pathological processes in living organisms, and therefore has significant implications for biology and medicine. The theoretical part of the thesis explores the fundamental principles of MS, HPLC, UV-VIS spectrometry, and BCA assay, including their advantages and limitations. MS provides high sensitivity and specificity, enabling the detection of peptides at low concentrations. HPLC allows for the efficient separation of peptides based on their physicochemical properties, thereby increasing the accuracy of quantification. The BCA assay is a simple and rapid method for measuring the total content of proteins and peptides through a colorimetric reaction. UV-VIS spectrometry offers precise and sensitive measurements based on the accurate and sensitive measurement of absorption or emission of electromagnetic energy by peptides. The practical part of the thesis focuses on the application of these methods for the quantification of peptides in various biological samples. The experimental results showed that the combination of UV-VIS spectrometry and MS provides synergistic benefits, allowing for detailed analysis and precise quantification of peptides. The BCA assay was utilized as a supplementary method for the rapid and simple determination of peptide concentrations.

Klíčová slova

proteín, peptid, proteomika, kvantifikácia peptidov, hmotnostná spektrometria

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 5. 8. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. René Lenobel, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie