Význam inhibice reparace radiačního poškození při indukci apoptózy

Bc. Radka Sedlaříková

Master's thesis

Inhibition of radiation-induced reparation during induction of apoptosis

Abstract:

Cílem diplomové práce bylo objasnit význam inhibice reparace radiačního poškození DNA lidských T-lymfocytárních leukemických buněk MOLT-4 a sledovat změny proteinů účastnících se buněčné signalizace vedoucí k reparaci poškození DNA či indukci apoptózy. Zaměřili jsme se na vliv specifického inhibitoru DNA-dependetní proteinkinasy, NU7026. Práce popisuje problematiku vlivu ionizujícího záření na mechanismy vedoucí k reakci buněk na poškození DNA na molekulární a buněčné úrovni. Byly využity metody stanovení apoptózy (stanovení viability buněk a průtokově cytometrická měření) a imunodetekce exprese a post-translačních modifikací proteinů (Western blotting) účastnících se zmíněných signálních drah (substráty ATM kinasy a další proteiny). Z námi získaných výsledků vyplývá, že při kombinovaném použití inhibitoru NU7026 (v ještě netoxické koncentraci) spolu s nízkými (v klinické terapii relevantními) dávkami ionizujícího záření dochází k potenciaci cytotoxických účinků obou nox na nádorové buňky. Tato kombinace si zaslouží další pozornost při hledání nových strategií kombinované léčby nádorových onemocnění.

Abstract:

The aim of this diploma thesis was to elucidate the importance of inhibition of radiation-induced DNA reparation in human leukemic cells and to study the changes of related proteins involved in signalling pathways, which lead to DNA damage reparation or induction of apoptosis. We studied the influence of specific inhibitor of DNAdependent proteinkinase, NU7026, on activation of the mentioned pathways. Here we describe the effect of ionizing radiation on molecular and cellular mechanisms leasing to DNA damage responses. We used methods for apoptosis assesment (cell viability count and flow cytometric analysis) and immunodetection of expression and posttranslational modifications of proteins (Western blotting) involved in this signalling pathways (substrates of ATM kinase and other proteins). Our results indicate that the combination of inhibitor NU7026 (at non-cytotoxic concentration) and low doses of ionizing radiation (relevant in radiotherapy) results in potentiation of the cytotoxic effect of both of the noxes in tumour cells. This novel approach might offer new strategies in combined treatment of tumour diseases.

Keywords

apoptóza, ionizující záření, DNA-dependentní proteinkinasa, inhibitor NU7026

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 5. 2008

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2008
• Supervisor: Mgr. Marcela Slováková, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Special Chemical and Biological Programmes / Analysis of Biological Materials