Vývoj rychlé metody stanovení celkového obsahu lipidů ve vzorcích rybí tkáně

Mgr. Zuzana Miháliková

Advanced ('rigorózní') thesis

Development of a method of a rapid determination of total lipids in fish tissue samples

Abstract:

This thesis presents the results of the literature search on the lipids – their classification and methods of extraction from various matrices. The aim of experimental part was the development a simple, non-laborious, fast, cheap, robust and environment friendly method for lipid determination in fish tissue samples. An amount of 5 g of fish tissue homogenate in a centrifuge tube was extracted with 5 mL of acetone/ethyl acetate mixture (6:4, v/v) using vigorous shaking and after addition of inorganic salts (2 g MgSO4 and 0.5 g NaCl) and agitation the organic phase was separated by centrifugation. An aliquot of the organic phase was air-dried and then oven-dried and the lipid content of the fish homogenate was determined gravimetrically on a wet weight basis. The performance of the proposed method was compared with a well-established method according to Smedes (1999) by analysing 66 fish tissue samples from different species with a wide range of lipid content (pollock, chub and salmon). In comparison with the method developed by Smedes, similar repeatability and good agreement between the results from both methods for all analysed samples was achieved. The linearity of the proposed method with a correlation coefficient of 0.9997 was obtained between 0.25 and 15% and limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) were 0.11% and 0.34% of total lipids in fish homogenate, respectively. The accuracy of the method was verified by the analysis of NIST standard reference material SRM 1946 (Lake Superior Fish Tissue) and the obtained recovery (at 10.17% of extractable fat) was 99.3% with a relative standard deviation (RSD) of 0.5% (n = 3).

Abstract:

V úvodu této rigorózní práce je zpracována literární rešerše na téma lipidy - jejich klasifikace a způsoby extrakce z různých biotických matric. Práce pokračuje experimentální částí, jejíž cílem byl vývoj jednoduché, rychlé, robustní a k životnímu prostředí šetrné metody na stanovení obsahu lipidů v tkáních ryb. 5 g rybího homogenizátu bylo extrahováno za intenzivního třepání 5 ml směsi aceton/ethylacetát (6:4, v/v). Následne byly přidány anorganické soli (2 g MgSO4, 0,5 g NaCl) a po opětovném protřepání a centrifugaci byla oddělena organická fáze. Alikvotní část extraktu byla odfoukaná vzduchem a následně dosušená. Obsah lipidů v homogenizátu byl stanoven gravimetricky vzhledem k hmotnosti mokrého vzorku. Navržená metoda byla srovnávána s již zavedeným způsobem stanovení lipidů podle Smedese, a to analýzou 66 vzorků různých druhů ryb se širokým spektrem obsahu lipidů (treska, jelec tloušť, losos). Pro všechny analyzované vzorky byla dosažena podobná opakovatelnost a dobrá shoda mezi výsledky z obou metod. Také byla potvrzena linearita metody s koeficientem korelace 0,9997, a to pro obsah lipidů v rozmezí 0,25 až 15%. Mez detekce (LOD) a kvantifikace (LOQ) byla 0,11% resp. 0,34% z celkového obsahu lipidů v homogenizátu ryb. Přesnost metody byla ověřena analýzou NIST standardního referenčního materiálu SRM 1946 (Lake Superior Fish Tissue), kdy byla získána výtěžnost (při 10,17% extrahovatelných lipidů) 99,3% s relativní směrodatnou odchylkou (RSD) 0,5% (n = 3).

Keywords

Lipidy, extrakce, QuEChERS, rybí tkáň, extrakcia, rybie tkanivo, Lipids, extraction, fish tissue

Language used: Slovak

Date on which the thesis was submitted / produced: 12. 10. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 7. 1. 2016
• Reader: Ing. Jitka Bečanová, Ph.D., doc. Ing. Radovan Kopp, CSc.

Masaryk University

Faculty of Science

Advanced ('rigorózní řízení') programme / field:
Chemistry / Environmental Chemistry