Vypracování metody stanovení aktivit glykosyltransferas

Bc. Pavel Tománek

Bachelor's thesis

Development of glycosyltransferase activity measurement methods

Abstract:

V bakalářské práci se věnuji metodám, kterými je možné změřit aktivitu enzymů glykosyltransfras. Vyvinutí spolehlivé metody pro měření aktivity těchto enzymů je základním předpokladem pro aplikaci glykosyltransferas při výrobě léčiv nebo například pro identifikaci a popis přírodních a mutantních enzymů. Existuje poměrně velké množství analytických testů, které sledují úbytek substrátu nebo naopak přírůstek produktu. Problémem je, že většina přírodních substrátů glykosyltransferas neobsahuje žádný chromofor nebo fluorofor. To brání detekci primárních látek, které se podílejí na glykosytransferasové reakci jednoduchými spektroskopickými technikami. To nás nutí k značení substrátů buď radiochemicky nebo fluorescenční značkou. Existují ale i šetrnější a méně časově, materiálově i instrumentálně náročnější metody. Jednou z nich je i fotometrická metoda založená na změně pH roztoku analytu v průběhu reakce. Tato metoda se jeví jako ideální pro screening i pro přesné měření aktivity enzymů.

Abstract:

In the thesis I study methods for measuring activity of glycosyltranferases. A reliable assay for measuring the activity of these enzymes for their use like drugs, either for application of naturals or mutants enzymes is needed. There are many analytical assays for enzyme activity determination, however. Most of substances or products of glycosyltransferases don´t contain chromophore or fluorophore. Therefore we can´t detect them by simple spectroscopics methods. We are forced to use the radiochemical or flourescent labeling of substrates. Moreover there are others methods more sparing and less time, material and instrumental consuming. One of them is a photometric method, which depends on pH changing in analyzed mixture during the reaction. This method seems to be ideal for the screening and determine the activity of glycosyltransferases.

Keywords

Enzymová aktivita, glykosyltransferasy, měření aktivity, enzymatický test, metody měření enzymové aktivity, enzyme activity, glycosyltransferases, aktivity measurement, enzymatic assay, methods for measuring enzyme activity

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 14. 5. 2012

Thesis defence

• Date of defence: 18. 6. 2012
• Supervisor: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry