Modulace autofágie u prostatických nádorových buněk vybranými naftochinony.

Bc. Jiří Kadlec

Bakalářská práce

Modulation of autophagy in prostate cancer cells by selected naphthoquinones.

Anotace:

Karcinom prostaty je jedním z nejčastějších rakovinných onemocnění u mužů nejen v České republice ale i celosvětově. Mechanismy programované buněčné smrti hrají významnou roli v udržování homeostázy organismu. Rezistence buněk k apoptóze a zvýšená míra autofágie jsou jedny z hlavních znaků nádorové transformace. V této práci jsme se zaměřili na geny regulující apoptózu a autofágii BECN1, BIRC5 a NFКB. Na buněčné linie prostaty jsme působili deriváty naftochinonu, naftazarinem a plumbaginem. Mechanismus toxicity těchto látek je založen na tvorbě ROS, které indukují apoptózu buněk. Nejdříve jsme analyzovali jejich cytotoxicitu pomocí MTT testu, abychom mohli stanovit vhodnou koncentraci naftochinonů k ošetření buněk. Změny exprese vybraných genů na úrovni mRNA jsme potom analyzovali pomocí qRT-PCR. Zjistili jsme, že plumbagin díky inhibici transkripčního faktoru NF-қB snižuje expresi antiapoptotického proteinu survivin. Důsledkem těchto změn je u metastatické nádorové linie PC-3 nárůst počtu apoptotických buněk, což jsme potvrdili pomocí průtokové cytometrie.

Abstract:

Prostate cancer is one of the most common cancers in the male population in the Czech Republic and worldwide. The mechanisms of programmed cell death play an important role in maintaining the homeostasis of the organism. Cell resistance to apoptosis and increased autophagy are some of the main features of neoplastic transformation. In this study we focused on apoptosis and autophagy regulating genes BECN1, BIRC5, and NFКB. Prostate cell lines were treated by derivates of naphthoquinone, naphthazarin and plumbagin. Mechanism of their toxicity is based on the formation of ROS that induces cell apoptosis. First we analyzed their toxicity using the MTT test in order to determine the right concentration of naphthoquinones to treat the cells. Changes in gene expression on mRNA levels were analyzed by qRT-PCR. We discovered that plumbagin downregulates antiapoptotic protein survivin through the inhibition of transcription factor NF-қB. The result of these changes is that the number of apoptotic cells increased in metastatic tumor cell line PC-3, which was confirmed by flow cytometry.

Klíčová slova

Karcinom prostaty, Apoptóza, Autofágie, Plumbagin, Naftazarin, Beclin, Survivin, NF-қB, Průtoková cytometrie, Prostate carcinoma, Apoptosis, Autophagy, Naphthazarin, Flow cytometry

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 19. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 17. 6. 2014
• Vedoucí: RNDr. Michal Masařík, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie