Příprava knock-outovaných linií Arabidopsis thaliana pro genovou rodinu CKX a jejich fenotypové změny během senescence

Kateřina Závodná

Master's thesis

Multiple CKX knockout lines of Arabidopsis thaliana and their response to senescence

Abstract:

Teoretická část diplomové práce je věnovaná metabolismu rostlinných hormonů cytokininů a jejich signální dráze. Dále popisuje proces senescence. Velká část práce je věnovaná metodám transgenoze rostlin. Zabývá se různými způsoby transformace, od použití Agrobacterium tumefaciens, přes přímé metody jako je biolistická metoda, až po dnes velice významnou metodu transformace pomocí zinc-finger nukleas. Praktická část popisuje metodu křížení rostlin za účelem přípravy double knock-outované homozygotní linie Arabidopsis thaliana pro geny AtCKX2 a AtCKX5. U těchto dvou genů byla zjištěna zvýšená exprese během listové senescence. Z přibližně 200 zkřížených linií rostlin byly úspěšně selektovány 4 homozygotní double knock-outované linie, které byly potvrzeny metodou PCR, Northern blot a PCR v reálné čase

Abstract:

In the theoretic part of master thesis, metabolism of plant hormones cytokinins and their signaling pathway is described. As well, mechanism and consequences of leaf senescence are disccused. The final part deal with different techniques for plant transformation, including Agrobacterium-mediated gene transfer, direct gene transfer method, where particle bombardement is the most exploited, and current approaches using zinc-finger nucleases. In the experimental part of master thesis, the crossing of plants and preparation of homozygote double knockout line of Arabidopsis thaliana for AtCKX2 and AtCKX5 genes is described. These two genes show extremely increased expression pattern during senescence. Four double knockout lines were successfully established and selected from approximately 200 crossing events and confirmed using methods of basic PCR, real-time PCR and Northern blot

Keywords

AtCKX, senescence, transgenoze rostlin, crossing-křížení rostlin, double knock-outovaná linie Arabidopsis

Keywords

AtCKX, senescence, plant transgenesis, crossing of plants, double knockout line of Arabidopsis

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 23. 4. 2010

Thesis defence

• Date of defence: 20. 5. 2010
• Supervisor: Petr Galuszka
• Reader: Tomáš Takáč

Univerzita Palackého

Přírodovědecká fakulta

Master programme / field:
Biochemie / Biochemie