Studium mikroRNA u "triple-negativního" (ER-alfa, PR, c-ErbB2 negativního) karcinomu prsu

Bc. Jaroslav Juráček

Master's thesis

MicroRNA analysis in "triple-negative" (ER-alfa, PR, c-ErbB2 negative) breast cancer

Abstract:

Triple-negativní karcinom prsu (TNBC – triple negative breast cancer) představuje agresivní podtyp karcinomu prsu, u kterého není aplikovatelná současná cílená terapie. Do vzniku a rozvoje tohoto onemocnění jsou významně zapojeny i mikroRNA (miRNA), které post-transkripčně regulují genovou expresi velkého množství genů a mohly by u tohoto onemocnění sloužit jako diagnostické, prognostické i predikční markery. Pomocí metody qRT-PCR byla u 81 vzorků TNBC stanovena hladina sedmi miRNA (miR-205, miR-99, miR-505, miR-125b, miR-187, miR-146, miR-24-2). Na základě korelací hladin exprese s OS a DFS bylo zjištěno, že zvýšená hladina miR-505 je asociována s delším celkovým přežitím pacientek (P = 0,0281) a vyšší hladina miR-205 vykazovala statisticky významnou korelaci s delším celkovým bezpříznakovým přežitím (P = 0,0125). Na buněčných liniích karcinomu prsu byl pomocí in vitro funkční analýzy stanoven vliv hladiny miR-505 a miR-187 na viabilitu, regulaci buněčného cyklu, migraci a apoptózu buněk. Po experimentálním zvýšení hladiny miR-505 bylo u buněčné linie MDA-MB-231 pozorováno hromadění buněk v G1 fázi buněčného cyklu (P = 0,0081). U stejné linie byl pozorován významný vliv miR-505 a miR-187 na inhibici migrace buněk (P = < 0,0001, resp. P = 0,0038). Vliv těchto miRNA na viabilitu a regulaci apoptózy nebyl prokázán. Výsledky studie ukázaly, že vyšší hladina miR-205 a miR-505 prokazatelně souvisí s lepší prognózou TNBC a naznačily možnou funkci miR-505 jako nádorového supresoru u triple-negativního karcinomu prsu.

Abstract:

Triple-negative breast cancer (TNBC) represents an aggressive subtype of breast cancer, in which current targeted therapy is not applicable. In formation and development of TNBC are significantly involved mikroRNA (miRNA), which post-transcriptionally regulate expression of many genes and could serve as diagnostic, prognostic and predictive markers in this malignancy. Using qRT-PCR, expression levels of miR-205, miR-99, miR-505, miR-125b, miR-187, miR-146, miR-24-2 in 81 samples of TNBC were detected. Based on the correlation with overall survival (OS) and disease free survival (DFS) higher levels of miR-205 (association with OS, P = 0,0271) and miR-505 (association with OS, P = 0,0281) were associated with better prognosis. In breast cancer cell lines, effect of miR-505 and miR-187 on cell viability, cell cycle regulation, migration and apoptosis was analyzed. In MDA-MB-231 cell line was increased level of miR-505 associated with accumulation of cells in G1 phase of cell cycle. In the same cell line was observed significant effect of these miRNA on cell migration. Higher levels of miR-505 (P = < 0,0001) and miR-187 (P = 0,0038) significantly decreased migration of MDA-MB-231 cells. The effect of these miRNA on cell viability and apoptosis was not detected. The results show that higher levels of miR-505 and miR-205 provably correlate with better prognosis in TNBC and suggest that miR-505 could be a novel tumor suppressor in triple-negative breast cancer.

Keywords

triple-negativní karcinom prsu, triple-negative breast cancer, BRCA1, mikroRNA, microRNA, prognostické markery, prognostic markers, in vitro charakterizace, in vitro characterization

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2013

Thesis defence

• Date of defence: 4. 6. 2013
• Supervisor: doc. RNDr. Ondřej Slabý, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Analytical Biochemistry