Příprava rekombinantního lidského ameloblastinu

Bc. Filip Petira

Diplomová práce

Preparation of recombinant human ameloblastin

Anotace:

Práce se zabývá srovnáním exprese proteinů v bakteriálních expresních systémech oproti expresi v kvasinkových expresních systémech. Velká část práce je věnována představení nejvýznamnějších kvasinkových druhů využívaných jako expresní systémy a také vektorům, které se v těchto druzích pro expresi používají. Cíle práce jsou zaměřeny na produkci ameloblastinu divokého typu v expresním systému E. coli a jeho následná purifikace. Dále na vytvoření vektoru pro kvasinkový expresní systém, který by obsahoval gen pro ameloblastin divokého typu a jeho další dva mutanty, a to konkrétně ameloblastin delta 5, který postrádá úsek kódovaný exonem 5 a ameloblastin c-terminální část, který kóduje daný protein od 197 do 421 aminokyseliny.

Abstract:

The thesis deals with the comparation of protein expression in bacterial expression systems agains expression in yeast expression systems. A big part of the thesis is devoted to introduction of the most important yeast species, which are used as expression systems and also to vectors which are used in these expression systems. The aims of thesis are focused on the production of ameloblastin wild type in E. coli as expression system and subsequent purification. Futher, to create a vector for yeast expression system, which contains the gene for ameloblastin wild type a others two mutatnts, namely ameloblastin delta 5, which lacks segment encoded by the exon 5 and ameloblastin c-terminal part, which encode the protein form the aminoacid 197 to 421.

Klíčová slova

Bakteriální expresní systémy, kvasinkové expresní systémy, S. cerevisiae, K. lactis, P. pastoris, purifikace proteinů, ameloblastin, In-Fusion cloning.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 5. 6. 2017
• Vedoucí: RNDr. Olga Heidingsfeld, CSc.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Bioanalytik