Hemocyty a ich charakterizácia v rámci bunkovej imunity včiel

Karolína FILINOVÁ

Bachelor's thesis

Hemocytes and their characterisation in the cellular immunity of bees

Abstract:

Teoretická časť práce je zameraná na charakterizáciu hemocytov A. mellifera, vrátane možností ich štúdia. Hemocyty sú analógy ľudských bielych krviniek, u bezstavovcov, ktorých hlavnou telovou tekutinou je hemolymfa. Hemocyty sú hlavnými sprostredkovateľmi zložky vrodenej imunity hmyzu, známej ako bunková imunita. Ich pôsobenie zahŕňa riadené imunitné odpovede ako sú fagocytóza, nodulácia, enkapsulácia a melanizácia. Klasifikácia hemocytov je predmetom sporu, vzhľadom na to, že terminológia jednotlivých druhov hemocytov je rôzna u rôznych druhov hmyzu. Cieľom experimentálnej časti práce bola najskôr optimalizácia metód izolácie a purifikácie hemocytov pre zavedenie rutinného protokolu. Ďalej to bola optimalizácia mikroskopického pozorovania hemocytov vo svetelnom poli, vrátane rôznych farbiacich techník hemocytov a stanovenie ich počtu v hemolymfe alebo v purifikovanej suspenzii hemocytov s využitím Bürkerovej komôrky. Rovnako bola pozornosť venovaná aj mikroskopickému stanoveniu životnosti hemocytov v nepurifikovanej hemolymfe v porovnaní s purifikovanou suspenziou hemocytov, s využitím farbiacej techniky Trypanovej modrej, a taktiež fluorescenčných sond, fluoresceíndiacetátu a propium jodidu. Purifikácia hemocytov z hemolymfy prebiehala pomocou centrifugácie na vrstve vysokohustotnej látky (Percollu). S využitím farbiva Trypanovej modrej bolo demonštrované, že túto metodiku ide použiť k zakoncentrovaní hemocytov, ktoré si zachovávajú svoju životaschopnosť. Predložená bakalárska práca tak napomáha k optimalizácii izolácie hemocytov a ich mikroskopickému pozorovaniu, pre ich ďalšie štúdium, vrátane ich lepšiemu porozumeniu v rámci bunkovej imunity včely medonosnej.

Abstract:

The theoretical part of barchelor's thesis is focused on the characterisation of A. mellifera hemocytes, including their study options. Hemocytes are analogs of human leukocytes in invertebraes, which main body fluid is hemolymph. Hemocytes are main mediators of one aspect of innate immunity in insect, also known as cellular immunity. Their effect consists of mediated immune responses, which include phagocytosis, enkapsulation and melanisation. The classification of hemocytes is matter of dispute, given that the terminology of individual types of hemocytes is different depending on the insect species. The purpose of experimental part was firstly the optimalisation of isolation and purification of hemocytes for establishment of routine protocol. Next goal was the optimalisation of microscopic observation of hemocytes in bright field and determination of their quantity in hemolymph or in purified suspension of hemocytes with use of Burker cell. The attention was also paid to microscopic determination of hemocytic vitality in non-purified hemolymph compared with purified hemolymph, with the use of dye method Trypan Blue, as well as fluorescent probe, fluorescent diacetate and propium iodide. The purification of hemocytes from hemolymph was done with the use of centrifugation on layer of high density substance (Percoll). With the use of the dye Trypan Blue was demonstrated, that this method is suitable for increase in concentration of hemocytes, which are preserving their vitality. The presented barchelor's thesis therefore helps to optimise the isolation of hemocytes and their microscopic obserbation, for their further study, including their better understanding within the cellular immunity of the honey bee.

Keywords

Hemocyty, bunková imunita, Apis mellifera, životnosť buniek, mikroskopické pozorovanie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 5. 2023

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Martina Janků, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry