Stanovení monoaminů ve vzorcích mikrodialyzátu pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí

Bc. Vítězslav Klíma

Master's thesis

Determination of monoamines in microdialyzate samples using HPLC with electrochemical detection

Abstract:

Tato diplomová práce se věnuje stanovení neurotransmiterů katecholaminové povahy pomocí kapalinové chromatografie s reverzní fází a elektrochemickou detekcí. V teoretické části jsou nastíněny jednotlivé metody, kterými lze monoaminy stanovit, přičemž jsou zde podrobněji popsány metody, kdy byla využita pro separaci kapalinová chromatografie na reverzní fázi, a pro detekci byly použity elektrochemické metody. V experimentální části je popsán průběh optimalizace a validace metody. Metoda byla použita pro stanovení katecholaminů z mikrodialyzátů mozku laboratorních zvířat, kdy vyvinutá metoda umožnila kvantitativně stanovit dopamin, kyselinu homovanilovou a kyselinu 3,4-dihydroxyfenyloctovou. Separace analytů probíhala na koloně Phenomenex Gemini C18, s využitím izokratické eluce, kdy byla jako eluční činidlo použita směs fosfátového pufru, acetonitrilu a methanolu v poměru 92,15:3:4,85 o pH 3,85. Separace probíhala při průtoku 1,1 mL/min a teplotě kolony 45°C. Metoda poskytla pro jednotlivé analyty limity detekce v rozmezí od 1,25 nM do 2,50 nM a limity kvantifikace v rozmezí od 4,16 nM do 8,32 nM. Byla ověřena použitelnost metody na reálných vzorcích mikrodialyzátu mozku potkana.

Abstract:

In this thesis a method for quantification of catecholamine neurotransmitters by reversed-phase liquid chromatography with electrochemical detection was developed. In the theoretical part of the thesis an overview methods for quantification of monoamines is presented with focus on methods combining reversed-phase liquid chromatography with electrochemical detection. In the experimental part the process of method optimization and validation is described. The method was used for analysis of catecholamines from brain microdialysates of laboratory animals with successful quantification of dopamine, homovanillic acid and 3,4-(dihydroxy)phenylacetic acid. The separation of analytes was achieved on Phenomenex Gemini C18 column with isocratic elution. The composition of mobile phase was phosphate buffer-acetonitrile-methanol (92.15:3:4.85) with pH adjusted to 3.85. The separation was optimized at column temperature of 45 °C with a mobile phase flow of 1.1 mL/min. Method achieved limits of detection for all analytes in the range 1.25–2.50 nM,with limits of quantification in the range 4.16–8.32 nM. The applicability of this method was assesed with real rat brain microdialysate samples.

Keywords

RP-HPLC, electrochemical detection, hormones, neurotransmitters, catecholamines, dopamine, homovanilic acid, Parkinson`s disease, depression, microdialysis, elektrochemická detekce, hormony, neurotransmitery, katecholaminy, dopamin, kyselina homovanilová, Parkinsonova nemoc, deprese, mikrodialýza

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2017

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2017
• Supervisor: doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Chemistry / Analytická chemie