Molekulárne farmárčenie: využitie rastlinnej biotechnológie pre heterológnu expresiu LL-37.

Alžbeta MIČÚCHOVÁ

Bakalářská práce

Molecular farming: the use of plant biotechnology for heterologous expression of LL-37.

Anotace:

Molekulárne farmárčenie (biofarmárčenie) predstavuje nový smer pre produkciu terapeuticky významných látok s využitím rastlinných expresných systémov. Jednou z hlavných výhod použitia rastlinných expresných systémov je možnosť zníženia nákladov spojených s bioprodukciou liečiv a prispenia tak k zvýšeniu dostupnosti nových účinných liekov na trhu. Značný potenciál terapeutického využitia majú prirodzene sa vyskytujúce antimikrobiálne peptidy, ktoré sú dôležitou zložkou vrodenej imunitnej odpovede takmer všetkých živých organizmov. Táto bakalárska práca je zameraná na stabilnú transformáciu nezrelých embryí rastlín jačmeňa siateho (Hordeum vulgare L. cv. Golden Promise) prostredníctvom baktérie A. tumefaciens nesúcej vždy príslušný binárny vektor pBRACT209 s rôzne navrhnutými génmi kódujúcimi ľudský antimikrobiálny peptid zo skupiny katelicidínov LL-37. Prostredníctvom PCR analýzy na genómovej úrovni boli selektované samostatné transgénne línie T0 generácie rastlín jačmeňa. U rastlín bola vykonaná analýza fenotypu a následne bola na základe relatívnej kvantifikácie expresie transgénu LL-37 v zrnách, koreňoch a listoch vybraných zástupcov T0 generácie transgénnych rastlín jačmeňa overená funkčnosť aj zrnová špecifickosť B hordeínového promótoru.

Abstract:

Molecular pharming (biopharming) represent a new technology for the production of compounds displaying therapeutic potencial with the use of plant expression systems. One of the major advantage of molecular pharming in plants include lower production costs compared to other production systems, which may in turn positively affect availability of new pharmaceutical products. Naturally occurring antimicrobial peptides represent important components of the innate immune response of almost all living organisms, which have been shown to have considerable potential as a novel therapeutic agents. The present study is focused on stable transformation of the immature barley embryos (Hordeum vulgare L. cv. Golden Promise) by A. tumefaciens carrying binary vector pBRACT209 with defferentially designed sequences coding for human cathelicidin LL-37. Independently transformed transgenic barley T0 lines were selected according to the PCR analysis at the genome level. Phenotypic analysis was performed on transgenic barley plants and funnctionality and grain specificity of the B hordein promoter were verified based on the relative quantification of transgenic RNA in grains, leaves and roots of selected T0 plants.

Klíčová slova

molekulárne farmárčenie, Hordeum vulgare L., katelicidín LL-37, B-HORp promótor, stabilná transformácia, génová expresia

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2015

Zveřejnit od: 14. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Edita Holásková

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie