Hodnocení aktivity peritoneálních makrofágů

Bc. Alena Moravcová

Master's thesis

Evaluation of peritoneal macrophage activity

Abstract:

Tato diplomová práce se zabývá stanovením tří cytokinů produkovaných peritoneálními makrofágy potkana - TNF?, IL-1? a IL-6 ve vztahu k rozdílnému přístupu operačního výkonu - laparotomickému či laparoskopickému. Byla měřena bazální produkce uvedených cytokinů a jejich produkce po stimulaci makrofágů bakteriálním lipopolysacharidem (LPS). Izolace buněk z peritonea probíhala ve dvou intervalech - 24 nebo 72 hodin po operaci. Vlastní analýze předcházela vždy 24 hodinová kultivace s, resp. bez LPS. Optimální koncentrace LPS vhodné pro stimulaci peritoneálních makrofágů bylo nutno experimentálně docílit. Zjištěná optimální koncentrace LPS byla 0,1 ?g/ml. Hladina cytokinů byla stanovena pomocí sendvičové ELISA metody. V teoretické části je popsána organizace imunitního systému a funkce jeho jednotlivých složek v imunitní odpovědi s důrazem na úlohu makrofágů. Významná část je věnována roli cytokinů v modulaci imunitní odpovědi. Dále je podána literární rešerše o dějích v peritoneální oblasti ve vztahu k laparotomickému či laparoskopickému zásahu do abdominální krajiny a zhodnocení systémové a lokální imunitní odpovědi, která tyto chirurgické zákroky doprovází. Experimentální část je věnována popisu principu EIA metod se zaměřením na ELISA metody a její variace. Dále je v této části uveden optimalizovaný postup izolace a kultivace peritoneálních makrofágů a vlastního stanovení jimi produkovaných cytokinů metodou ELISA. Výsledková část obsahuje postup optimalizace koncentrace LPS vhodného pro stimulaci peritoneálních makrofágů. Dále zahrnuje grafickou a slovní dokumentaci bazální i stimulované produkce jednotlivých cytokinů makrofágy izolovanými 24, resp. 72 hodin po zákroku. Bazální produkce cytokinů byla signifikantně vyšší u laparoskopované skupiny, nejvyšší produkci cytokinů stimulovanými makrofágy vykazovala naopak skupina po laparotomii. Zhodnocení získaných výsledků je rozebíráno v diskusi.

Abstract:

This thesis deals with the determination of the three cytokines produced by rat peritoneal macrophages - TNF?, IL-1? and IL-6 in relation to the different approach of surgery - laparoscopic or laparotomic. Was measured basal production of cytokines and those of their production after stimulation of macrophages by bacterial lipopolysaccharide (LPS). Isolation of peritoneal cells was performed in two intervals - 24 or 72 hours after surgery. The actual analysis is always preceded by 24 hours of cultivation with, respectively without LPS. The optimal concentration of LPS suitable for stimulation of peritoneal macrophages was necessary to achieve experimentally. The observed optimal concentration of LPS was 0,1 ?g/ml. The level of cytokines was determined using a sandwich ELISA method. The theoretical part describes the organization of the immune system and functions of its individual components in the immune response with emphasis on the role of macrophages. A significant part is devoted to the role of cytokines in the modulation of immune responses. In addition, is given a literature review about actions in the peritoneal area in relation to laparotomic or laparoscopic intervention into the abdominal landscape and assess systemic and local immune response that accompanies the surgery. The experimental section is devoted to describing the principle of EIA methods, focusing on the ELISA method and its variations. Additionally, the optimized process isolation and cultivation of peritoneal macrophages and optimized determination of cytokines measured by ELISA is described there. Results contain the process of optimization of an appropriate concentration of LPS suitable for stimulation of peritoneal macrophages. It also includes a graphical and verbal documentation of basal and stimulated production of cytokines by macrophages isolated 24, resp. 72 hours after surgery. Basal cytokine production was significantly higher in laparoscopic group, the highest cytokine production by stimulated macrophages showed a group after laparotomy. Evaluation of obtained results is discussed in the discussion.

Keywords

peritoneální makrofágy, cytokiny, ELISA, LPS

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 5. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 1. 6. 2011
• Supervisor: doc. MUDr. Halka Lotková, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Special Chemical and Biological Programmes / Analysis of Biological Materials